1、艾滋病病毒感染者及艾滋病患者 CD4+T 淋巴细胞检测及质量保证指南A Guideline for CD4+ T Lymphocyte Counting and Quality Assurance in People Living with HIV/AIDS 中国疾病预防控制中心2013 年 08 月1本指南由中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心艾滋病参比实验室组织有关专家撰写，由中国疾病预防控制中心批准执行。编写主持人：蒋岩主要编写人员 ：肖瑶 徐建青 尚红 仲人前 蒋岩 汪宁 钟平 李敬云 邱志峰 姚均 潘品良 邢文革 邱茂锋编写单位：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心参编单
2、位：复旦大学公共卫生中心中国医科大学附属第一医院上海第二军医大学长征医院上海疾病预防控制中心中国人民解放军军事医学科学院北京协和医院顾问： 世界卫生组织，Seguy Nicole，Zhang Lan 中美艾滋病项目，Ou, Chin-Yih，Bulterys, Marc 2前 言随着我国艾滋病病毒感染者及艾滋病病人抗病毒治疗和检测咨询工作的深入开展，对 CD4+T 淋巴细胞的检测需求日益增加。截至 2012 年，全国已经有超过 400 台各型流式细胞仪和 CD4+T 淋巴细胞计数仪，服务于艾滋病病毒感染者和艾滋病病人，这些仪器在艾滋病防治工作中发挥着重要作用。为了满足基层 CD4+T 淋巴细胞
3、检测技术需求，保证检测质量，中国 CDC 于 2006 年颁布了艾滋病病毒感染者及艾滋病患者 CD4+T 淋巴细胞检测质量保证指南（试行，以下简称指南），为保证实验室质量发挥了重要作用。近几年，相关领域技术方法取得了很多新发展，同时在指南使用过程中也发现了一些问题，为此，以我国艾滋病防治现行政策和相关技术标准为依据，参考世界卫生组织、美国、加拿大和澳大利亚等国家的现行指南，对我国现行艾滋病病毒感染者及艾滋病患者 CD4+T 淋巴细胞检测质量保证指南（试行）进行了修订。本次指南（试行）修改，重点补充了检测方法，细化了质控要求。主要包括：1、修改艾滋病病毒感染者及艾滋病患者 CD4+T 淋巴细胞检
4、测质量保证指南 为艾滋病病毒感染者及艾滋病患者 CD4+T 淋巴细胞检测及质量保证指南 ；2、分别增加了人员要求章节，样品采集、保存、运输和接收章节，常规检测方法；3、取消原质量保证一章；4、更改外部质控一章为实验室能力验证。修订后的指南分为八章，包括总则、实验室环境与设施、样品采集、保存、运输和接收、常用检测方法、室内质控、实验室能力验证和实验室安全。本指南适用于目前国内使用的 CD4+T 淋巴细胞检测的主要仪器，旨在提高各地实际工作中 CD4+T 淋巴细胞检测质量，为因地制宜地建立适合当地实验室条件的质量保证规程和标准操作程序提供有益的参考。本指南修订过程中，得到了许多病毒和免疫学领域资深
5、专家的支持，他们为规范我国 CD4+T 淋巴细胞检测，保证有效治疗艾滋病做出了无私奉献，在此我们表示深深的敬意和谢意。本指南自发布之日起实施，同时终止艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南（试行）。本指南解释权属于中国疾病预防控制中心。3致 谢本指南写作过程中，得到了世界卫生组织和中美艾滋病项目的大力支持，也得到了许多病毒和免疫学领域资深专家和工作在CD4+T淋巴细胞检测一线同仁们的支持，使得本指南能在短时间内完成修订，并呈现给工作在CD4+T淋巴细胞检测一线的同仁们，为进一步规范我国CD4+T淋巴细胞检测，保证有效治疗艾滋病做出了无私奉献，在此我们表示深深的敬意。4目
6、 录第一章 总则 .5第二章 人员要求 .6第三章 实验室环境与设施 .7第四章 样品采集、 保存、 运输和接收 .9第五章 常见检测方法 .11第六章 室内质控 .13第七章 实验室能力验证 .21第八章 实验室安全 .24附表 1 CD4+淋巴细胞检测样品发送 /接收单 .26附表 2 药物及其他生物学因素对 CD4+T 淋巴细胞测定 .27附表 3 CD4+淋巴细胞检测结果报告单 .28附表 4 CD4+淋巴细胞检测能力验证样品接收表 .29附表 5 CD4+淋巴细胞检测能力验证样品结果报告表 .30参考文献 .335第一章 总则1.1 意义准确可靠的 CD4+T 淋巴细胞检测为评价 H
7、IV 感染者免疫状况、判断疾病进程、评价抗病毒药物治疗效果和估测预后提供了重要指标。世界卫生组织(WHO)和欧美等国家均推荐：艾滋病病毒（HIV）感染者应每 3-6 个月检测一次 CD4+T 淋巴细胞水平，并以该指标决定是否开始预防间质性浆细胞肺炎和其它机会性感染，以及开始抗逆转录病毒治疗。依照世界卫生组织和美国 CDC 关于成年人和未成年人 HIV 感染和病例监测分类系统定义，CD4+T 淋巴细胞水平也作为判断 HIV 相关临床病程的标准。因而保证 CD4+T 淋巴细胞检测质量是非常重要的。艾滋病病毒感染者及艾滋病患者 CD4+T 淋巴细胞检测及质量保证指南对保证 CD4+T 淋巴细胞检测质
8、量有重要的指导意义。 1.2 目的指导我国从事 CD4+T 淋巴细胞检测工作的实验室人员，规范 CD4+T 淋巴细胞检测方法和程序，完善实验室质量保证与质量控制，提高检测的准确性。1.3 适用范围适用于我国检测艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞的所有实验室。1.4 缩略语Human immunodeficiency Virus suffers/patients （HIV/AIDS）: 艾滋病病毒感染者和艾滋病患者；Human immunodeficiency Virus（HIV）：艾滋病病毒； Acquired immune deficiency syndrome（AIDS）：艾滋
9、病；Standard operation procedure（SOP）：标准操作程序； Forward scatter（FSC ）：前向散射Side scatter（SSC）：侧向散射Single platform technology（SPT）：单平台技术；The identity of patient ( ID)：患者编号；Proficiency testing ( PT)：能力验证；6第二章 人员要求2.1 进行 HIV/AIDS 患者 CD4+T 淋巴细胞检测人员应接受过省级以上艾滋病实验室安全、检测技术和质量控制培训以及仪器厂家提供的培训。2.2 进行 HIV/AIDS 患者 CD4
10、+T 淋巴细胞检测的人员须具有上岗资格，正式检测患者样品前，应检测一定数量的样品或者质控品，将检测结果与省确证中心实验室结果进行比对，由确证中心实验室评价其检测能力，检测结果准确、稳定后方可检测。2.3 CD4+T 淋巴细胞检测的管理人员和检测人员接受实验室生物安全责任人和实验室管理人员的监督。2.4 实验室的安全责任人要对工作秩序和环境的安全负责，所有工作人员都有责任保护自己和他人的安全。7第三章 实验室环境与设施3.1 CD4+T 淋巴细胞检测实验室设施理想的 CD4+T 淋巴细胞检测实验室应该有专用实验室。如果空间有限，CD4+T 淋巴细胞检测可以与 HIV 检测的筛查和确正实验室共享一
11、个空间。本指南推荐的是理想的CD4+T 淋巴细胞检测实验室的空间安排。样品接收和处理在一单独房间，样品检测、分析和报告在另一单独房间。该类实验室应符合国家生物安全二级 (BSL-2)实验室的有关规定。3.2 CD4+T 淋巴细胞检测实验室空间安排的一般性原则 实验室应有以下区域：CD4+T 淋巴细胞检测实验室分区按照生物安全的要求建议分为样品接收区、样品存放区、样品处理区、样品检测区、结果分析和发布区及资料存放区（实验室档案)，可以在一个房间也可以在两个房间。如果两个房间，样品接收区、样品存放区和样品处理区可以在一个房间，样品检测区、结果分析和发布区、资料存放区（实验室档案)可以在另一个房间。
12、 CD4+T 淋巴细胞检测前样品的接收、存放和处理可以共享血清学实验室设备和空间。 图 1 显示两种情况：如果用一个房间， 流向如图 1 所示；如果用两个房间，中间虚线视为一堵墙。8图 1 CD4+T 淋巴细胞检测实验室功能分区图(建议) (注: 具体空间尺寸应与设备大小相一致)如在独立实验室进行 CD4+T 淋巴细胞检测，其实验室规划和工作流程应如图 1 所示，虚线以上相对独立；如果属于共用实验室也应按照如图 1 所示的区域设计实验室。实验室空间规划应参考仪器制造商提供的主机及其附属设备的尺寸。样品检测和数据分析可以在同一实验室或不同实验室进行。样品接收区 样品存放区样品处理区流式细胞仪及附
13、属设备计算机打印机冰箱结果分析和发布区房间进出口样品检测与分析区样品准备区9第四章 样品采集、 保存、 运输和接收4.1 样品采集和保存4.1.1 样品采集选择合适的抗凝剂，用于血液学检测或流式细胞仪的免疫表型检测。用于流式细胞仪免疫表型检测的抗凝剂：K2EDTA、K3EDTA 、酸性枸橼酸葡萄糖溶液（ACD ）或肝素抗凝。a)抗凝管的准备和标记：选择含有抗凝剂（KEDTA）的采血管(2ml 或 5ml)作为血样采集管。应保证采血量达到但不超过抗凝管容积的水平，以保证抗凝剂的最终有效浓度。尽可能采用真空管，避免使用注射器采集血样。将被检者 ID 号标签贴于抗凝管上，并在CD4+T 淋巴细胞检测
14、样品发送/接收单上注明采样日期和时间(见附表 1)。b)采血时间：鉴于 CD4+T 淋巴细胞数日间自然变化的个体差异，每一病人采样时间应尽可能集中在某个相同的时段。如：每次采样时间均在上午或均在下午。c)采样量：成人采集静脉血 5ml，采集儿童静脉血样品建议用儿童型注射器和小试管(2ml) ，采集婴儿样品较为困难，用小试管采集 0.5-1ml 即可。所有血样应立刻注入事先加入适当抗凝剂的试管。d)样品混匀：采集的静脉血注入抗凝管后，立即轻轻颠倒抗凝管 6-8 次，使血液与抗凝剂充分混匀，防止血液凝固。e)影响因素：采样时间、混匀程度和运输温度等都可以影响血液的质量。 4.1.2 样品保存样品到达后，应及时进行处理，如不能马上处理，应在室温（18-25）保存，避免极端温度（结冰或大于 37）。样品应在采集后 48 小时内完成检测，若采用 CD45 设门可在 72 小时内完成检测 。4.2 样品运输
