1、117三、马传染性贫血防治技术规范马传染性贫血（Equine Infectious Anemia, EIA,简称马传贫）,是由反转录病毒科慢病毒属马传贫病毒引起的马属动物传染病。我国将其列为二类动物疫病。为预防、控制和消灭马传贫，依据中华人民共和国动物防疫法及有关的法律法规，制定本规范。1 适用范围本规范规定了马传贫的诊断、疫情报告、疫情处理、防治措施、控制和消灭标准。 本规范适用于中华人民共和国境内从事马属动物饲养、经营，马属动物产品加工、经营，及从事动物防疫活动的单位和个人。2 诊断2.1 流行特点本病只感染马属动物，其中，马最易感， 骡、 驴次之，且无品种、性别、年龄 的差异。病马和带毒
2、马是主要的传染源。主要通过虻、蚊、刺蝇及蠓等吸血昆虫的叮咬而传染，也可通过病毒污染的器械等传播。多呈地方性流行或散发，以 79 月份发生较多。在流行初期多呈急性型经过，致死率较高，以后呈亚急性或慢性经过。2.2 临床特征本病潜伏期长短不一，一般为 2040 天，最长可达 90 天。118根据临床特征，常分为急性、亚急性、慢性和隐性四种类型。急性型 高热稽留。 发热初期，可 视黏膜潮红，轻度黄染；随病程发展逐渐变为黄白至苍白；在舌底、口腔、鼻腔、阴道黏膜及眼结膜等处，常见鲜红 色至暗红色出血点（斑）等。亚急性型 呈间歇热。一般发热 39以上，持 续 35 天退热至常温，经 315 天间歇期又复发
3、。有的患病马属动物出现温差倒转现象。慢性型 不规则发热，但发热时间短。病程可达数月或数年。隐性型 无可见临床症状，体内长期带毒。2.3 病理变化 2.3.1 剖检变化急性型 主要表现败血性变化，可视黏膜、 浆膜出现出血点（斑），尤其以舌下、齿龈、鼻腔、阴道黏膜、眼 结膜、回 肠、盲 肠和大结肠的浆膜、黏膜以及心内外膜尤为明显。肝、脾 肿 大，肝切面呈现特征性槟榔状花纹。 肾显著增大，实质浊肿，呈灰黄色，皮质有出血点。心肌脆弱，呈灰白色煮肉样，并有出血点。全身淋巴结肿大，切面多汁，并常有出血。亚急性和慢性型 主要表现贫血、黄染和 细胞增生性反应。脾中（轻）度肿大， 坚实，表面粗糙不平，呈淡 红色
4、；有的脾萎缩，切面小梁及滤泡明显；淋巴小结增生，切面有灰白色粟粒状突起。不同程度的肝肿大，呈土黄或棕红色，质地较硬，切面呈豆蔻状花纹（豆蔻肝）；管状骨有明显的红髓增生灶。1192.3.2 病理组织学变化主要表现为肝、脾、淋巴结和骨髓等组织器官内的网状内皮细胞明显肿胀和增生。急性病例主要为组织细胞增生，亚急性及慢性病例则为淋巴细胞增生，在增生的组织细胞内，常有吞噬的铁血黄素。2.4 实验室诊断2.4.1 马传贫琼脂扩散试验(AGID)（见附件）。2.4.2 马传贫酶联免疫吸附试验(ELISA)(见附件)。2.4.3 马传贫病原分离鉴定（见附件）。2.4.4 结果判定 具备马传贫流行特点、临床症状
5、、病理变化，可做出初步诊断； 2.4.1 或 2.4.2 或 2.4.3 结果阳性，即可确诊。3 疫情报告 3.1 任何单位和个人发现 疑似疫情，应当及时向当地动物防疫监督机构报告。3.2 动物防疫监督机构接到疫情 报告并确认后，按动物疫情报告管理办法及有关规定及时上报。4 疫情处理4.1 发现疑似马传贫 病马属动物后，畜主应立即隔离疑似患病马属动物，限制其移动,并立即向当地动物防疫监督机构报告。动物防疫监督机构接到报告后,应及时派员到现场诊断，包括流行病学调查、临床症状检查、病理解剖检查、采集病料、 实验室诊断等，并根据诊断结果采取相应防治措施。1204.2 在马属动物饲养地，确 诊为马传贫
6、病畜后，当地县级以上人民政府畜牧兽医行政管理部门应当划定疫点、疫区、受威胁区;县级以上地方人民政府根据需要组织有关部门和单位采取隔离、扑杀、销毁、消毒、限制易感动物和动物产品及有关物品出入等控制、扑灭措施。若呈暴发流行时，由当地畜牧兽医行政管理部门，及时报请同级人民政府决定对疫区实行封锁，逐级上报国务院畜牧兽医行政管理部门。县级以上人民政府根据需要组织有关部门和单位采取隔离、扑杀等强制性控制和扑灭措施，并迅速通报毗邻地区。4.2.1 划定疫点、疫区、受威胁区疫点 指患病马属动物所在的地点，一般是指患病马属动物所在的养殖场（户）；散养时，是指患病马属动物所在的自然村（屯）；或其它有关屠宰、经营单
7、位。疫区 疫点外延 3 公里范 围内的区域，包括病畜发病前 3 个月经常活动，可能 污染的地区。疫区划分时注意考虑疫区的饲养环境和天然屏障（如河流、山脉等）。受威胁区 是指疫区外延 5 公里范围内的区域。4.2.2 封锁疫区封锁期间，禁止染疫和疑似染疫的马属动物及其产品出售、转让和调群；繁殖马属动物要用人工授精方法进行配种；种用马属动物不得对疫区外马属动物配种；对可疑马属动物要严格隔离检疫；关闭马属动物交易市场。禁止非疫区的马属动物进入疫区，并根据扑灭疫情的需要对出入封锁区的人员、运输工具及有关物品采取消毒和其121它限制性措施。4.2.3 隔离当发生马传贫时，要及时应用临床检查、血清学试验等
8、方法对可疑感染马属动物进行检测，根据检测结果，将马属动物群分为患病群、疑似感染群和假定健康群三类。立即扑杀患病群，隔离疑似感染群、假定健康群，经过 3 个月观察，不再发病后，方可解除隔离。4.2.4 监测 疫区内应对同群马属动物隔离饲养，所有马属动物每隔 1 个月进行一次血清学监测；受威胁地区每 3 个月进行一次血清学监测。4.2.5 扑杀患病马属动物、阳性马属动物在不放血条件下进行扑杀。4.2.6 无害化处理病畜和阳性畜及其胎儿、胎衣、排泄物等按照 GB16548畜禽病害肉尸及其产品无害化处理规程进行。4.2.7 消毒对患病和疑似患病的马属动物污染的场所、用具、物品严格进行消毒；受污染的粪便
9、、垫料等必须采用堆积密封发酵 1 个月等方法处理。4.2.8 封锁的解除封锁的疫区内最后一匹阳性马属动物扑杀处理后，并经彻底消毒等处理后， 对疫区监测 90 天，未见新病例；且经血清学检查 3 次（每次间隔 30 天），未检出阳性马属动物的，对所污染场所、设施设备和122受污染的其它物品彻底消毒，经当地动物防疫监督机构检查合格后，方可由原发布封锁令机关解除封锁。5 预防与控制5.1 检疫异地调入的马属动物，必须来自非疫区。调出马属动物的单位和个人，应按规定报检，经当地动物防疫监督机构进行检疫(应包括血清学检查)，合格后方可调出。马属动物需凭当地动物防疫监督机构出具的检疫证明运输。运输途中发现疑
10、似马传贫病畜时，货主及运输部门应及时向就近的动物防疫监督机构报告，确诊后，由动物防疫监督机构就地监督畜主实施扑杀等处理措施。调入后必须隔离观察 30 天以上，并经当地动物防疫监督机构两次临床综合诊断和血清学检查，确认健康无病，方可混群饲养。5.2 监测和净化5.2.1 马传贫控制区、稳定控制区 采取“监测、扑 杀、消毒、净化”的综合防治措施。每年对全县 612 月龄的幼驹，用血清学方法监测一次。如果检出阳性马属动物，除按规定扑杀处理外，应对疫区内的所有马属动物进行临床检查和血清学检查，每隔 3 个月检查一次，直至连续 2 次血清学检查全部阴性为止。5.2.2 马传贫消灭区 采取“以疫情监测为主
11、” 的综合性防治措施，每县每年抽查存栏马属动物的 1%（存栏不足 10000 匹的，抽 检数不少于 100 匹，存栏不足 100 匹的全检）,做血清学检查,进行疫情监测,123及时掌握疫情动态。6 控制和消灭标准 6.1 稳定控制标准 6.1.1 县级稳定控制标准A、全县（市、区或旗）范围内连续 5 年没有马传贫临 床病例；B、全 县（市、区或旗）停止注苗一年后， 连续两年每年抽检 300 匹份马属动物血清（不满 300 匹全检），经血清学检查，全部阴性。6.1.2 市级稳定控制标准全市（地、盟、州）所有县（市、区、旗）均达到稳定控制标准。6.1.3 省级稳定控制标准 全省所有市（地、盟、州）
12、均达到稳定控制标准。6.1.4 全国稳定控制标准全国所有省（市、自治区）均达到稳定控制标准。6.2 马传贫消灭标准 6.2.1 县级达到消灭标准，在达到 稳定控制标准的基础上，还应符合以下条件: 全县（市、区或旗）范围内在达到稳定控制标准后，连续两年每年抽检 200 匹份马属动物血清（不满 200 匹者全检），血清学检查全部为阴性。6.2.2 市级马传贫消灭标准全市（地、盟、州）所有县（市、区、旗）均达到消灭标准。6.2.3 省级马传贫消灭标准124全省所有市（地、盟、州）均达到消灭标准。6.2.4 全国马传贫消灭标准 全国所有省（市、自治区）均达到消灭标准。125附件 1马传染性贫血琼脂扩散
13、反应试行操作方法1 检验用琼脂板的制备1.1 取高级琼脂糖 1 克或普通琼脂 1.2 克直接放入加有 500mL蒸馏水的三角瓶中，配成 2%的琼脂溶液，在沸水浴中煮沸，全融化后再冷凝，切成 11.5cm 3 小块，装入干净砂布袋中，用 10 倍量自来水冲漂两天，每天换水两次，然后改用无离子水冲漂 12 天，每天换水两次。将冲漂完毕的琼脂小块装入 1000mL 三角烧瓶中，同时加入500mL 无离子水再加入相当于配制 1000mL 磷酸缓冲液（PBS 液）或硼酸缓冲液（BBS 液）的各种盐类用量，再加入 1%硫柳汞溶液10mL，在沸水浴中使之全融化并混匀。若是取优质琼脂 1 克时，可直接放入含有
14、万分之一硫柳汞的100mL 的 PBS 或 BBS 液中，用热水浴融化混匀。1.2 融化后以两层纱布夹薄层脱脂棉过滤，除去不溶性杂质。1.3 将直径 90mm 的平皿放在水平台上，每平皿倒入热融化琼脂液 1518mL，厚度约 2.5mm 左右，注意不要产生气泡，冷凝后加盖，把平皿倒置，防止水分蒸发，放在普通冰箱中可保存两周左右。根据受检血清样品多少亦可采用大、中、小三种不同规格的玻璃板。1016cm 的玻璃板加注 热琼脂液 40mL；67cm 的加注11mL；327.6cm 的加注 6mL。琼脂经处理后配成的琼脂液，可装瓶中用胶塞盖好，以防水分蒸126发，待使用琼脂板时，现融化现倒。1.4 打
15、孔反应孔现用现打。打孔器为外径 5mm 直径的薄壁型金属打孔器。在坐标纸上画好七孔型图案。把坐标纸放在带有琼脂板的平皿或玻璃板下面，照图案在固定位置上用金属管打孔，将切下的琼脂板取出，勿使琼脂膜与玻璃面离动。外周孔径为 5mm，中央孔径为 5mm，孔间距 3mm，如 图 1 所示。图 1 7 孔型(1) (2)(3) G (4)(5) (6)当受检血清数量多时，可用如图 2 所示的检测 40 份血清的图案。图 2 40 孔型01 02 03 04 05 06 + G + G + G +07 08 09 10 11 1213 14 15 16 17 18 19 20+ G + G + G + G +21 22 23 24 25 26 27 2829 30 31 32 33 34 + G + G + G +35 36 37 38 39 40注解：图 1、图 2 中的“G” 字周围应有圆圈。
