1、目 录目 录1第二十三章 DNA操作的基本技术The Basic Technologies for DNA Manipulations目 录2第一节核酸印迹技术与分子杂交Nucleic Acid Blotting and Molecular Hybridization目 录3什么是核酸分子杂交 核酸分子杂交（ nucleotide molecular hybridization） 以 DNA的变性、复性为理论基础 指具有一定同源序列的两条核酸单链（ DNA或RNA），在一定条件下按碱基互补配对原则经过复性处理后，形成异源双链的过程 目 录4一、 Southern 印迹可用于分析基因拷贝数的变化
2、 由 E. M. Southern在 1975年提出 可用于分析基因拷贝数的变化 基本操作过程包括 待测 DNA样品的制备和基因探针的标记； 待测 DNA样品的电泳分离； 电泳分离的 DNA经变性、转移、固定到合适的固相支持物； 特异性核酸探针与膜上 DNA片段杂交，放射自显影或显色检测目的 DNA的存在。 目 录5Southern印迹分析基本流程滤纸NC膜凝胶滤纸电泳 转移 杂交，显影酶切 DNA样品上样 DNA印迹重物缓冲液目 录6二、 Northern 印迹和 RT-PCR可用于分析基因转录水平的变化 Northern blot是将 RNA从凝胶中转印到硝酸纤维素膜上，定性分析 mRNA
3、的常用方法； RT-PCR是以 mRNA为模板反转录合成cDNA、再以 cDNA为模板进行特异性扩增，进行 RNA定性或定量分析的一种方法； 二者均可用于分析基因转录水平的变化 。目 录7三、原位分子杂交技术可用于基因及其表达产物的定位分析 原位杂交（ in situ hybridization， ISH）即利用分子杂交技术来进行基因及其表达产物定位分析的一种技术； 可用于基因及其表达产物的定位分析。目 录8（一）利用原位杂交技术进行基因定位分析 荧光原位杂交（ fluorescence in situ hybridization, FISH） 基因组原位杂交（ genome in situ hybridization， GISH） 目 录9FISH箭头所示为杂交信号，结合带型分析可判断染色体位置目 录10（二）利用原位杂交技术确定特定基因的表达定位 RNA原位杂交 整体原位杂交（ Whole mount in situ hybridization, WISH ）
