1、 四川理工学院本科毕业论文麻布七中高乌甲素的含量测定学 生：学 号：专 业：制药工程 班 级：制药 2013 卓越指导教师：穆祯强 四川理工学院化学工程学院二一七年五月四川理工学院本科毕业论文 摘要I 摘 要麻布七系毛茛科乌头属植物高乌头（Aconitum sinomontanum Nakai）的根，产自河北、甘肃和四川等地。其性温、味苦、有毒，具有祛风除湿，活血止痛的功效，用于风湿腰腿痛、胃气痛、跌打损伤的治疗。本文通过水提醇沉法和pH 梯度萃取法得到麻布七生物碱部位，然后应用高效液相色谱，采用标准曲线法测定了生物碱部位中高乌甲素含量为 36.54%，由此计算高乌甲素在麻布七中的含量为 0.
2、68%，从而为麻布七和含有麻布七药材的成药药品质量控制提供了参考，为麻布七在现有临床应用基础上的开发利用奠定了基础。关键词：麻布七；高乌甲素；高效液相色谱；含量测定四川理工学院本科毕业论文 ABSTRACTIIABSTRACT Root of Tall Monkshood derived from Aconitum sinomontanum Nakai of root, a species of the Ranunculaceae in Aconitum Medical herbs. growing in Hebei, Gansu, Si chuan and other places. Its
3、 temperature, bitter, toxic, with dampness, relieving pain ect. It is used for the treatment of rheumatoid low back pain, Stomach, bruises. In this paper, the alkaloid parts of Root of Tall Monkshood were obtained by water extraction and pH gradient extraction, and then using HPLC, using the standar
4、d curve method to determine the alkaloid site in the high eugenol content of 36.54%. The calculated content of Lappaconitine in Root of Tall Monkshood was 0.68%. So as to provide a reference for the quality control of medicine and medicine containing Root of Tall Monkshood medicine, which laid the f
5、oundation for the development and utilization of Root of Tall Monkshood on the basis of existing clinical application.Key words: Root of Tall Monkshood; Lappaconitine; HPLC; Determination content四川理工学院本科毕业论文 目录目录摘 要 .IABSTRACT.II第一章 绪论 .11.1 前言 .11.2 麻布七的化学成分 .11.3 高乌甲素的药理作用 .21.3.1 镇痛作用 .21.3.2 局部麻
6、醉作用 .21.3.3 降温消热作用 .21.3.4 抗炎消热作用 .21.3.5 抗肿瘤作用 .21.3.6 抗心律失常作用 .21.3.7 增强免疫力 .31.4 高乌甲素的市场前景 .31.5 麻布七的药理作用 .3第二章 实验部分 .52.1 实验材料与仪器 .52.1.1 实验药材 .52.1.2 实验试剂与仪器设备 .52.2 麻布七提取分离流程图 .62.3 生物碱的提取分离 .62.3.1 水提浓缩 .62.3.2 醇沉浓缩 .72.3.3 pH 梯度萃取 .72.4 高效液相色谱测定麻布七中生物碱部分高乌甲素的含量 .82.4.1 供试品配制 .82.4.2 对照品配制 .8
7、2.4.3 高效液相色谱的条件和操作 .8四川理工学院本科毕业论文 目录2.4.4 高效液相色谱系统适用性试验 .92.4.5 标准曲线的绘制 .102.4.6 含量测定 .10第三章 实验结果与讨论 .113.1 生物碱提取分离实验结果 .113.1.1 水提浓缩 .113.1.2 醇沉浓缩 .113.1.3 pH 梯度萃取 .113.2 系统适用性结果 .113.2.1 理论塔板数 .113.2.2 分离度 .123.2.3 重复性实验 .123.2.4 拖尾因子 .133.3 标准曲线的绘制 .133.4 高乌甲素的含量 .143.5 实验讨论 .143.5.1 实验安全 .143.5.
8、2 结果讨论 .14第四章 结论与展望 .154.1 结论 .154.2 展望 .15参考文献 .16致谢 .18附 录 .19四川理工学院本科毕业论文 绪论1第一章 绪论1.1 前言麻布七为毛茛科乌头属植物高乌头的根，根长约 20 cm，圆柱形，粗约 2 cm，多生长于林中和山坡中，分布于四川、青海、甘肃、云南、湖北等省，近几年在甘肃地区已大量引种生产，并成为其主要商品药材之一。麻布七性温味苦，用于治疗心悸、胃气病、跌打损伤等症状，为我国民间常用草药 1。麻布七中主要含有二萜类生物碱，对麻布七的化学成分研究到目前为止，从麻布七中共分离了 28 种化合物，其中为二萜类生物碱的共有 26 种，例
9、如：高乌甲素、冉乌碱、乙酰冉乌碱、高乌亭甲等等，其中高乌甲素为麻布七根中含量最多的单体成分 2，它不仅具有抗炎作用 3，而且具有癌症疼痛治疗的作用。陈银石研究 4就表明长期服用高乌甲素类药物比服用哌替啶类药物治疗肝癌疼痛的疗效明显。麻布七具有抗炎、祛风除湿等作用，尤其是其镇痛效果作用于癌症及其他疼痛病症方面是有良好的作用，具有良好的市场前景。1.2 麻布七的化学成分在麻布七中，二萜类生物碱的占比很大。至今在麻布七根中，发现了 28 种化合物，经过鉴定，二萜生物碱占 26 种。主要类别为 2,5：（1）C 18 二萜生物碱：高乌甲素(lappaconitine) 、N-去乙酰高乌甲素(N-lea
10、cetyl-lappaconitine)、冉乌碱(ranaconitine)、N-去乙酰冉乌碱(N-leacetylranaconitine )、高乌宁甲(sinomontanine A)、高乌宁乙 (sinomontanine B)、高乌宁己(sinomontanine F)、高乌宁辛(sinomontanine H ) 、高乌碱甲(sinaconifine A)、高乌碱乙(sinaconitine B)、刺乌宁(lappaconine)、刺乌定(lappaconidine) 、excelsine、8-O-acetylexcelsine、高乌宁庚(sinomontanine G)、ranac
11、oni-dine 、高乌宁丁(sinomontanine D)、高乌宁戊(sinomontanine E)；（ 2）C 19 二萜生物碱：高乌宁丙(sinomontanine C)、高乌宁壬(sinomontanine I)、高乌亭甲(sinomon tanitine A)、高乌亭乙(sinomontanitine B) 、去亚甲光飞燕草碱(demethylenedelcorin)、硬飞燕草碱(18-0-methylgigactonine)；（3） C20 二萜生物碱：septatisine、来本宁(lepenine) ；（4）其他部分：N-( chloromethyl) taspine、牛扁
12、酸单甲酯 (lycaconitic acidmonomethyl ester)。四川理工学院本科毕业论文 绪论21.3 高乌甲素的药理作用1.3.1 镇痛作用刘铭佩 6以大鼠进行实验。实验结果表明：用高乌甲素为实验对象灌胃，发现实验对象的炎症性疼痛得到改善，表明高乌甲素的具有镇痛效果。用高乌甲素为原料制成的氢溴酸高乌甲素，虽然它的镇痛作用赶不上吗啡 7，但是它的镇痛作用与哌替啶的阵痛作用相当，更是解热镇痛药氨基比林的 7 倍之多 8。不仅如此，高乌甲素在手术后镇痛作用也是有良好的效果，不但可用它来协助患者机体的功能得以恢复，使患者尽快的走出病房出去活动，而且在预防手术之后的并发症中发挥着重要而
13、积极的作用 9。1.3.2 局部麻醉作用将氢溴酸高乌甲素注射至硬膜外间隙之后，它将直接在神经根上发挥作用，阻滞从手术区段所引起的有害刺激。角膜局部麻醉用 0.1%高乌甲素的作用就相当于 0.84%可卡因的局部麻醉作用，它对小鼠的坐骨神经传导阻滞作用分别达到可卡因和普鲁卡因的 5.25 倍和 13 倍 10，因此，高乌甲素相对于可卡因和普鲁卡因，它用于浸润麻醉的镇痛效果更强。1.3.3 降温消热作用高乌甲素注射入人体之后，将 Na+通道阻膈和神经传导中断，在突触间隙上，去甲肾上腺素的量提升，这样间接影响了产热中枢，使它释放的 P 物质减少，最终能够降温消热。在临床实践中发现高乌甲素对中枢性产热功
14、能具有较良好的抑制作用，因此，相对于阿司匹林类药物靠加速散热达到而达到退热的效果，高乌甲素明显具有很好的优势，患者的发热症状控制效果更为理想 11。1.3.4 抗炎消热作用当多种炎症发生时，毛细血管的渗出会增加，通透性会也会得到提升，使用高乌甲素时，以上现象会得到抑制。此外，肾上腺皮质功能也会变强，耳廓、足趾、下肢肿胀等得到有效的抑制 12。1.3.5 抗肿瘤作用实验证明：对于抗小鼠肝癌、S180，高乌甲素具有一定的作用。作用于小鼠体内，不仅对其体重无任何明显的影响，而且对荷瘤小鼠的细胞免疫功能有显著增强的作用 13。四川理工学院本科毕业论文 绪论31.3.6 抗心律失常作用实验证明：以大鼠作
15、为实验对象，使它诱发心律失常，然后将其注射氢溴酸高乌甲素，都能发现大鼠心律失常值降低。高乌甲素也能改善对犬结扎冠状动脉前降支所导致的缺血性心律失常 14。1.3.7 增强免疫力氢溴酸高乌甲素使网状内皮细胞的增生得到有效的刺激，从而使白细胞、单核巨噬细胞所具有的吞噬能力增强，使其免疫力提高 11。1.4 高乌甲素的市场前景癌症患者在中晚期时，它们会出现难以忍受的疼痛，它们就会迫切的希望能有一种镇痛的药物为之所用，吗啡和哌替啶虽然能够镇痛，但是它们的副作用大。现如今来说，高乌甲素不仅镇痛效果好，而且副作用小。通过硬膜外腔注射的高乌甲素比肌内和静脉注射等方法产生的疗效更好。虽然硬膜外腔注射吗啡也有镇
16、痛作用，但是吗啡的副作用大，无形中给患者增加了不必要的麻烦。总而言之，我们在临床上可以使用高乌甲素进行硬膜外术后的镇痛作用 15。高乌甲素对于轻中度疼痛有好的疗效，但是对于重度疼痛的效果不理想，出现这个问题应该与它使用的剂量有联系 16，高乌甲素需要从中药制剂、增加剂量、联合其他中西药物等方向继续深入研究。以更好的使其能够为临床应用服务。1.5 麻布七的药理作用1.5.1 治疗风湿性关节炎用麻布七风湿药酒和旭痹冲剂对比做治疗类风湿性关节炎的临床研究。分别对关节压痛（指数） 、关节肿胀数、双手平均握力 kPa、15 米步行时间（S） 、晨僵时间（h） 、ESR 、RF 滴度、CRP 、IgG、I
17、gA、 IgM 等指数进行临床观察。研究表明，在使用麻布七风湿药酒的两个月时间里我们观察的各项指数都有明显的改善，其中 ESR、CRP、RF 等异常指数都向正常趋近，而关节压痛、关节肿胀及晨僵时间等指数的改善是最为明显的。和旭痹冲剂相比，麻布七风湿药酒的作用起效时间慢且药效作用相对比较温和，但对类风湿性关节炎患者的双手握力和 15 米步行的作用强于旭痹冲剂 17。1.5.2 外用辅助治疗局部癌性疼痛在进行临床研究时，将病人分为两组，一组使用麻布七温敏凝胶与阿片类四川理工学院本科毕业论文 绪论4镇痛药合用并且麻布七温敏凝胶是外用于痛处，另一组直接使用阿片类镇痛药。该研究是采用数字评分量表的分级对
18、疼痛进行分级。通过记录两组患者每天的阿片类镇痛药的使用用量和发生不良反应的次数。不良反应的表现一般为便秘、恶心呕吐、头昏头晕。临床研究表明，两组患者在用药后的疼痛强度都有明显下降且下降的程度没有明显差异的时候，只使用阿类镇痛药的一组比麻布七温敏凝胶与阿片镇痛药一组的阿类镇痛药使用用量和发生不良反应的次数要多。当然药量的使用多少也影响着不良反应发生的概率。所以麻布七温敏凝胶外用辅助局部癌性疼痛能有效的减少阿类镇痛药的药量，减少不良反应的发生 18。1.5.3 治疗腰肌劳损腰肌劳损主要分为三种类型，分别是寒湿型、淤血型、肾虚型。在临床研究中使患者单独使用麻布七止痛片，以 30 天为周期，观察患者的治疗情况。研究表明，用麻布七止痛片治疗腰肌劳损的有效率达到了 90%以上，能有效的治疗腰肌劳损并且在临床研究中未发现不良反应 19。1.6 研究的目的和内容高乌甲素作为麻布七的主要生物活性成分，决定着麻布七的药理作用。所以要想了解麻布七的药理作用强度，检测麻布七中高乌甲素的含量是必不可少的环节。本文拟通过水提醇沉法和 pH 梯度萃取法得到麻布七生物碱部位，然后应用高效液相色谱，采用标准曲线法测定了生物碱部位中高乌甲素的含量，并结合生物碱提取率计算麻布七药材中高乌甲素的含量。
