1、中国石油天然气集团公司科学研究与技术开发项目项目总结报告项 目 名 称：安全环保关键技术研究与推广课 题 名 称：石油石化生态保护和土壤及地下水污染防治技术研究与示范专 题 名 称：海岸线石油污染环境生物治理及生态修复技术研究课 题 编 号：2011D-4605-0101主 管 部 门：中国石油天然气集团公司科技管理部承 担 单 位：中国石油集团安全环保技术研究院中国石油大学（北京）项 目 经 理：课 题 经 理：岳 勇 阎光绪起 止 年 限：2011 年 7 月至 2013 年 12 月2013 年 12 月填制中 密级：目 录第一部分 工作总结报告1 计划任务书要求.11.1 攻关目标及主
2、要研究内容 .11.1.1 总体研究目标 .11.1.2 年度研究目标 .11.1.3 主要研究内容 .11.2 技术经济考核指标 .31.3 研究工作进度安排 .42 研究工作总结.52.1 研究内容概要 .52.2 完成的主要工作量 .62.2.1 收集分析文献 500 余篇（其中外文文献 200 余篇） .62.2.2 分阶段开展大连溢油污染海岸线环境现状调研 .62.2.3 筛选大连海岸线石油降解土著菌种 80 株 .72.2.4 开展 5 种植物的石油污染修复可行性研究 .72.2.5 确定合成并克隆石油降解关键基因序列 2 种，完成基因工程菌及高效石油降解酶制剂的构建 .72.2.
3、6 构建石油污染海岸线室内修复平台，进行微生物室内修复研究 .72.2.7 开展微生物-植物联合修复室内研究 .72.2.8 完成石油污染海岸线环境生物治理技术现场中试研究 .82.3 对外合作执行情况 .82.3.1 对外合作安排、研究进展及取得的阶段成果 .82.3.2 经费拨付情况 .102.3.3 对课题的支撑作用 .102.4 主要研究成果 .102.4.1 大连新港石油污染海岸线生态环境现状调研 .102.4.2 大连新港高效稠油降解菌的筛选、鉴定及降解特性研究 .112.4.3 石油降解超级基因工程菌的构建 .122.4.4 耐盐碱的石油污染高效修复的海岸线土著植物的选育 .12
4、2.4.5 石油污染海岸线环境生物治理技术室内试验 .122.4.6 石油污染海岸线环境生物治理技术现场中试试验 .122.5 取得的主要创新点 .122.6 现场应用情况 .132.7 技术有形化情况 .132.8 问题及建议 .143 知识产权说明.153.1 申报专利情况 .153.2 发表论文情况 .153.3 其他知识产权情况 .163.3.1 技术秘密登记 .163.3.2 技术规范 .163.4 查新情况 .164 经费使用情况.175 组织管理情况.176 主要参加单位及科研人员.18第二部分 技术研究报告1 大连新港石油污染海岸线生态环境现状调研.11.1 海岸线自然环境概况
5、 .11.1.1 地理位置 .11.1.2 地形地貌 .21.1.3 气象气候 .31.1.4 水文特征 .41.1.5 土壤植被 .51.2 石油污染海岸线样品的采集和分析 .71.2.1 调研采样 .71.2.2 泄漏原油性质 .151.3 海岸线海水及岸滩土壤样品分析 .201.3.1 分析指标与检测方法 .201.3.2 分析结果 .201.4 小 结 .222 大连海岸线高效石油降解菌的筛选、鉴定及降解特性研究.242.1 实验材料与药品 .242.2 海水样品微生物群落结构分析 .242.3 本源耐盐高效石油降解菌的筛选 .252.3.1 本源耐盐微生物的浓缩富集 .252.3.2
6、 高效石油降解菌的初筛 .252.3.3 高效石油降解菌单株分离与纯化 .252.3.4 菌株保藏 .252.4 海水样品微生物群落结构分析 .252.5 菌种筛选与降解特性评价结果 .402.5.1 以原油为唯一碳源的菌种初筛与纯化 .402.5.2 DL-1 菌株生长曲线和原油降解能力 .422.6 降解率测定方法的准确度和重现性 .432.6.1 筛菌结果 .432.6.2 小结 .462.7 以原油中的代表组分筛选高效嗜盐石油降解菌 .462.7.1 以噻吩为唯一碳源筛菌结果 .462.7.2 以吡啶为唯一碳源筛菌结果 .502.7.3 以苯为唯一碳源筛菌结果 .532.7.4 以二甲
7、苯为唯一碳源筛菌结果 .582. 8 几种石油污染物降解菌降解效果的比较 .642.9 稠油降解菌株的鉴定 .642.9.1 菌株 .642.9.2 实验方法 .652.9.3 结果与讨论 .662.9.4 本章小结 .722.9.5 附图 .742.10 高效稠油降解菌降解特性研究 .782.10.1 实验方法 .782.10.2 结果与讨论 .792.10.3 本章小结 .863 石油降解超级基因工程菌的构建.873.1 石油降解的分子生物学基础 .873.2 试验材料及试剂 .883.2.1 菌种、质粒及抗生素 .883.2.2 实验用酶及试剂 .893.2.3 DNA 提取试剂 .89
8、3.2.4 提取质粒所需试剂 .903.3 重组分关键降解基因的获得 .903.3.1 试验方法 .903.3.2 重组分关键降解基因序列 .923.4 高产酶基因工程菌的构建 .933.4.1 试验方法 .933.4.2 高产酶基因工程菌构建结果 .983.5 高效降解石油污染酶制剂的制备 .1013.5.1 高产酶制剂基因工程菌的发酵培养 .1013.5.2 高效酶制剂的制备及保存 .1013.5.3 高效酶制剂的分子鉴定和纯化 .1013.6 小结 .1024 耐盐碱的石油污染高效修复的海岸线土著植物的选育.1044.1 土著植物选育范围 .1044.2 植物耐盐碱性和重油污染抗逆性 .
9、1054.2.1 试验方法 .1054.2.2 盐胁迫对植物育苗的影响 .1074.2.3 重油污染对植物育苗的影响 .1074.3 植物石油降解特性 .1084.4 小结 .1105 石油污染海岸线环境生物治理技术室内试验研究.1125.1 石油污染海岸线室内模拟实验装置设计 .1125.2 实验装置的启动 .1145.2.1 人工海水配方 .1145.2.2 潮汐规律模拟 .1155.2.3 装置启动 .1155.3 本源菌剂对重油污染海岸线修复性能的研究 .1155.3.1 试验设计 .1155.3.2 菌剂修复效果 .1165.3.3 菌剂+营养剂修复效果 .1175.3.4 菌剂+表面活性剂修复效果 .1185.4 小结 .1196 固定化高效石油降解菌剂的制备及原油降解效果初探.1216.1 固定化高效石油降解菌剂的制备方法 .1216.1.1 材料 .1216.1.2 活性炭纤维的预处理 .1216.1.3 高效石油降解菌群的固定化 .1216.2 固定化高效石油降解菌剂原油降解效果评价 .1226.2.1 固定化高效石油降解菌剂的生长曲线测定 .1226.2.2 活性炭纤维用量对石油降解性能的影响 .1236.2.3 盐度对原油降解性能的影响 .1246.2.4 pH 对原油降解性能的影响 .
