克隆形成实验(共3页).doc

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精选优质文档-倾情为你奉上克隆形成实验细胞生长状况有关指标的检测方法一、细胞计数这是细胞培养中常用的基本技术之一。所用材料为血球计数板,巴氏吸管和显微镜。细胞计数的基本步骤:(1)取清洁计数板和专用盖玻片,用丝绸布轻轻拭干.(2)取细胞悬液0.3mL,加入0.9mL结晶紫(或台盼至)染液,混匀后滴半滴于血球计数板内,以充满不外溢为宜。也可直接将细胞悬液在一侧滴加到盖玻片中,不要溢出,也不要过少或出现气泡.(3)在显微镜下用10物镜观察计数四角大分格中的细胞数。代入下式得出细胞密度。 细胞数/ml=(4大格细胞数之和/4)104稀释倍数台盼蓝染色法可计算出活细胞数和死细胞数以测定细胞存活百分率。一般0.5%1%的台盼蓝染液可使死细胞染成蓝色,活细胞不着色。此外还可用0.02%的藻红B染液将死细胞或受损细胞染成红色,或用0.05%的苯胺黑染液将死细胞染成黑色。细胞存活百分率=(4大格活细胞数/4大格活细胞+死细胞数)100%细胞计数除用上述方法外,目前还有新型的自动计数仪,可供大规模细胞计数工作使用。各种型号的计数操作不尽相同,可

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