全基因合成(共2页).doc

精选优质文档-倾情为你奉上一目的将一系列化学合成的oligo通过PCR的方法拼装成客户所需的基因序列，并将合成的基因克隆入pMD18-T载体。二. 方法1. 基因序列的QC：对所需合成的基因全序列进行分析，检查基因内部是否含有复杂二级结构和重复序列。根据序列的具体情况设计合成方案；2. 根据基因序列分析的结果，进行单链oligo的设计及合成；3. 利用PCR将合成的oligo拼接成完整的基因；4. 将合成好的基因装入pMD18-T载体并转化至感受态细胞DH5a；5. 测序验证重组克隆中基因序列是否与要求相符。三. 材料1. 克隆载体：pMD18-T（Takara公司，载体图谱如下）：基因插入位点四. 结果1. 重组克隆名称： 抗性：Amp 质粒DNA体积：20 ul 含质粒的甘油菌液体积：300 ul 储存条件：-20C2. 测序验证结果（重组克隆中插入基因序列，经拼接）：五. 结论所合成的基因经测序验证