原核表达及纯化总结(共7页).doc

精选优质文档-倾情为你奉上His标签重组蛋白大量表达及纯化一 筛选及鉴定 1 将构建好的连接产物进行转化DH5 鉴定表达载体和目的片段的连接一般为10L连接体系，此步转化方法如下： 取100L DH5感受态细胞，加入到10L连接产物体系中冰上放置30min42准确热激90秒冰上放置3min加入300L无Amp+ 的LB培养基，37 100rpm/min振荡培养1h将400L菌液全部涂LB平板（含Amp+）水平放置30 min待菌液完全吸收后，在37温箱中倒置培养过夜（1216 h），直至出现单菌落。2 阳性克隆的PCR鉴定方法如下 挑取单菌落于200L含Amp+LB培养基中（用2.0的离心管），摇床200rpm/min，37培养4h，待菌液浑浊后，取1L做菌液PCR鉴定。PCR扩增体系如下： 取1 L菌液作为模板反应体系如下：模板1 L10PCR反应缓冲液（含Mg2+ ）2 LdNT