1、FACS Calibur 操作手册一、构造1.电源：在仪器的左侧下方2.仪器的面板：在仪器前方面板的右下方有 3 个流速控制键（LO/MED/HI）及 3 个功能控制键（RUN/STANDBY/PRIME） （下图 4.1） 。a:流速控制： LO: 样品流速 12ul/min MED: 样品流速 35ul/min HI: 样品流速 60ul/min b:功能控制： RUN：绿色时表示样品开始输入，黄色表示仪器不正常。STANDBY：无样品或者预热时的位置，此时激光管的功率会下降，可延长其寿命。PRIME：自动冲洗进样针，一个反冲的过程，通常在进样针有堵塞现象的时候启用。c: 鞘液桶与废液桶：
2、位于仪器正面下方的储液箱内。3.样品的输入区在仪器的中部 :上样针、样品支架（下图 4.3 ） 。4.数据处理系统：苹果机 CELLQUEST 软件。二、模板的建立：若在桌面 MODLE 中没有你所需要的模板，则重新建立一个，具体的步骤入下：1.双击打开 CELLQUEST 软件，2.点击 Acquire Acquire Descripton, 打开 Acquire Descripton 对话框，点击 chang 按钮建立数据存放的路径，以及文件的名称。根据样品所标记的荧光染料选择合适的接收通道，FACS Calibur 有 3 个接收通道。2008 年 6 月升级为 4 通道，增加 633n
3、m 的激光器，可检测 APC、CY5 等荧光素。3.然后在对话框的右侧对应的通道位置写上荧光素的名称。4.在工具栏中选择散点图工具，其横坐标 FSC-H，纵坐标为 SSC-H。5.在工具栏中点击所选的图形类型，拉动鼠标成图，然后点击 X 或者 Y 轴的名称，更改坐标轴的名称。6.根据你的实验对照样品设定 gate，在工具栏中选择 gate 的不同形状，将在图形中集中得成团细胞选中。同时设定 Marker 线，点击工具栏中的横线或者正方形椭圆等，在直方图中我们使用横线作标记，散点图中选择十字或者其他正方形椭圆以及不规则图形作为标记。7.测定实验样品。三、双色检测步骤：以 FITC、 PE 为例。
4、1.打开桌面 MODEL 文件夹，双击选择当日所需模版 FITC PE。2.工作栏 Acquire Acquisition & Storage 设定好收集记录的细胞区域及细胞数 10000 或20000 后点击 OK。3.设置存储文件的路径： 工作栏 Acquire Parameter Description Driectory： Change Data XX 老板 XX 使用人 建立新日期文件，话框左下角点击 New Folder， 输入如 070101 Create。4.设置存储文件名字：工作栏 Acquire Parameter Description File：Change 设置存储文
5、件名字 在 Custom Prefix 栏改名 OK。5.如果用以前的相对应实验的实验条件：工作栏 Cytometer Instrument Settings Open Data 寻找相应的实验文件 Open 回到先前 Instrument Settings 的对话框 Done OK6.Acquistion Control 对话框 setup 打勾 在上样处更换对照样品管（BLANK 空白细胞） 点击 Acquire 根据样品情况调整 Detectors/Amps，调整 FSC，SSC 的 Voltage 大小，把细胞调整到适当的 位置 调整 FL1-H ，FL2-H 的 Voltage 大小
6、，调整阴性细胞群主要集中于左下角 点击 Pause setup 去掉勾 点击 Acquire 正式收集细胞。7.前一个样品采集完后，setup 打勾 在上样处更换单染 FITC 的对照样品管 如果发现FITC 荧光串色到 PE 通道，调整 Compensation 对话框中 FL2- 0.0%FL1，扣除串色。 点击 Pause setup 去掉勾 点击 Acquire 正式收集细胞。8.前一个样品采集完后，setup 打勾 在上样处更换单染 PE 的对照样品管 如果发现PE 荧光串色到 FITC 通道，调整 Compensation 对话框中 FL1- 0.0%FL2，扣除串色。 点击 Pa
7、use setup 去掉勾 点击 Acquire 正式收集细胞。9.后面的样品按照现对照样品仪器条件采集，更换样品，更改样品名字，直接点击 Aquire开始记录数据。10.待收集到相应的细胞数，仪器会自动停止记录。如果细胞数不够预设的量，或是需要中途停止收集，点击 Pause 点击 Save 直接记录数据。四、单色检测的基本操作步骤：1.在桌面上双击 MODEL 文件夹，选择自己需要的实验模板2. 菜单栏 Acquire Acquisition & Storage 设定收集的数目3.菜单栏 Acquire Parameter Description 设置存储文件的路径 .设置存储文件名字4.调用以前的实验模板5.或者根据对照样品情况调整 Detectors/Amps，调整 FSC，SSC 的 Voltage 大小，把细胞调整到适当的位置 调整接收通道（FL1/FL2/FL3）的 Voltage 大小，调整阴性细胞群主要集中于 10 的一次方以内。6.然后开始实验样品，细胞收集方法同双色测定一样。
