1、基因鉴定报告品系编号 T000014 品系名称 B6-Tdgtm1Nju 品系背景项目编号 项目经理 方案设计样品类型 样品编号 样品数量鉴定人 鉴定日期 鉴定要求 PCR配繁信息 繁育代数 PCR 反应体系试剂 体积 (ul) 规格10X Buffer 2.5ddH2O 16.75Primer 1 10uMPrimer 1 10uMMg2+ 2 25mMdNTPs 0.5 10mM eachTaq 0.25 5U/ulTemplate 1补充说明：Tdg flox 突变杂合子小鼠可以存活并有繁育能力。通过同源重组的方法在 exon3-7 的两侧引入同向的 loxp 位点（第二个 loxP 通
2、过 frt-neo-frt-loxp cassette 引入） 。当与带有 Cre 重组酶的小鼠杂交后，可得到同时带有 Tdgflox 基因和 Cre 基因的后代，Cre 重组酶的表达会导致 exon3-7 蛋白编码区被删除。引物信息编号 引物名称 引物序列 条带大小 引物说明 备注TDG-1st-loxpF CACCCCTAACTGGGGTTGTCTC1TDG-1st-loxpR CAGCATTGCTCAAAGGTAACTGTGMutant=543bpWild type=446bpHeterozygote=543bp and 446bp1st LoxPTDG-2nd-loxpR CATGCA
3、AGTTTGATCTCCAGCAC2 Neo3F TCTGAGGCGGAAAGAACCAGMutant=327bpWild type= 0bpHeterozygote=327bp2nd LoxP常规 PCR 程序 降落 PCR 程序 (touch down)适于引物：1，2 适用引物：Seg. Temp. Time Cycle Seg. Temp. Time Cycle Temp/cycle1 95 5min 1 95 5min2 95 30s 2 98 30s3 58 30s 3 65 30s -0.54 72 60s 2-4,35 4 72 45s 2-4,205 72 5min 5 98
4、 30s6 10 hold 6 55 30s7 72 45s 5-7,208 72 5min9 10 hold电泳图通过 PCR 鉴定1st LoxP: single LoxP site, locate on the left of the figureTDG-1st-loxpF: 5- CACCCCTAACTGGGGTTGTCTC -3 TDG-1st-loxpR: 5- CAGCATTGCTCAAAGGTAACTGTG -3 产物长度: Mutant=543bpWild type=446bpHeterozygote=543bp and 446bp2nd LoxP: LoxP and Frt-Neo-Frt site, locate on the right of the figureTDG-2nd-loxpR: 5- CATGCAAGTTTGATCTCCAGCAC -3 Neo3F: 5- TCTGAGGCGGAAAGAACCAG -3 产物长度: Mutant=327bpWild type= 0bpHeterozygote=327bp注：B6 为阴性对照，是 B6 基因组 DNAN 为空白对照,无模板的对照DL2000 条带： 2000bp1000bp750bp500bp250bp100bp测序或酶切结果分析与结论
