实验二十-感受态细胞的制备及外源基因导入(共3页).doc

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精选优质文档-倾情为你奉上实验二十 感受态细胞的制备及外源基因导入原理 转化(transformation)是将异源DNA分子引入另一细胞品系,使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段。转化过程所用的受体细胞一般是限制-修饰系统缺陷的变异株,即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株,常用R-、M-符号表示。受体细胞经过一些特殊方法(如电击法、CaCl2、MgCl2等化学试剂法)的处理后,细胞膜的通透性发生变化,成为能容许带有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞。在一定条件下,将带有外源DNA的载体分子与感受态细胞混合保温,使载体DNA分子进入受体细胞。进入细胞的DNA分子通过复制、表达,实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。将经过转化后的细胞在选择性培养基中培养,即可筛选出转化体(transformant)即带有异源DNA分子的受体细胞。 本实验以E.coliDH5菌株为受体细胞,用MgCl2处理受体菌使其处于感受态,然后与pUC19质粒共保温,实现转化。pUC19具抗氨苄青霉素的特性即Ampr,将转化后的全部受体细胞经过适当稀释,在含氨苄青霉

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