1、上海西唐生物科技有限公司 电话 :021-55229872 55229873 技术咨询 : 人 肌酸激酶同工酶 (CK-MB)ELISA 试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内 ) 原理 本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗 人 CK-MB 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 CK-MB 与单抗结合，加入生物素化的抗 人 CK-MB，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin 与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在 450nm 处测 OD 值， CK-MB浓度与 OD 值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中 CK-
2、MB 浓度。 试剂盒组成 （ 2-8 保存 ） 酶标 板 （ Coated Wells） 96孔 酶标抗体工作液 （ Enzyme Conjugate） 12ml 10标本稀释液（ Sample Buffer） 12ml 20浓缩洗涤液（ Wash Buffer） 50ml 标准品 （ Standards） ： 4000ng/瓶 2瓶 底物工作液（ TMB Solution） 12ml 第一抗体工作 液 （ Biotinylated Antibody） 12ml 终止液 （ Stop Solution） 12ml 准备试剂与收集血样 1. 收集标本：血清、血浆（ EDTA、柠檬酸 盐、肝素抗凝
3、）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 保存 48 小时 ；更长时间须冷冻（ -20 或 -70 ）保存，避免反复冻融。 2. 标准品液配制：使用前加入 2ml 蒸馏水 混匀，配成 2000ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管，第一管加标本稀释液 900ul，第二至第八管加入标本稀释液 500ul。在第一管中加入 2000ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul，移至第二 管 。如此反复作对倍稀释，从第七 管 中吸出500ul 弃去。第八 管 为空白对照。 3. 10 标本稀释液用蒸馏水作 1:10 倍稀释（ 示例： 1ml 浓稀释液 +9ml 蒸馏
4、水）。 4. 洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例： 1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水） 检测程序 1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul，将反应板充分混匀后置 37 120 分钟。 2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。 3. 每孔中加入第一抗体工作液 100ul。将反应板充分混匀后置 37 60 分钟。 4. 洗板：同前。 5. 每孔加酶标抗体工作液 100ul。将反应板置 37 30 分钟。 6. 洗板：同前。 7. 每孔加入底物工作液 100ul，置 37 暗处反应 15 分钟。 8. 每孔加入 100ul 终止液混匀。 9. 30 分
5、钟内用酶标仪在 450nm 处测 吸光值。 结果计算与判断 1. 所有 OD 值都应减除空白值后再行计算。 2. 以标准品 200、 100、 50、 25、 12.5、 6.25、 3.12、 0 ng/ml 为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。 3. 根据样品 OD 值在该曲线图上查出相应 CK-MB 含量 即可 。 试剂盒性能 1. 灵敏度 ： 最小的 CK-MB 检测浓度小于 2ng/ml。 2. 特异性： 可同时检测重组或天然的 人 CK-MB。 不与 人 其它细胞因子有交叉反应。 3. 重复性：板内、板见变异系数均小于 10。 注意事项 1. 以上标准孔及待 测 样品均建议做复孔，每次测定应同时 做 标准曲线。 2. 洗涤过程 很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及 OD 值错误地升高。 3. 板条开封后剩余板条要再封好，保持 板条干燥 。 4. 本试剂盒宜置 4oC 冰箱保存。 5. 本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！
