1、鸡新城疫的实验室诊断及免疫效果的评价目的1、掌握鸡新城疫的临诊要点。2、了解和掌握鸡新城疫的实验室诊断和免疫监测技术。 内容1、鸡新城疫的临诊要点。2、鸡新城疫的实验室诊断。NDV的分离及鉴定；NDV毒力的鉴定3、鸡新城疫的免疫效果评价鸡新城疫的免疫监测血凝试验 (HA)和血凝抑制试验 (HI)血凝试验（ HA）和 血凝抑制试验 (HI)HA和 HI的原理 HA试验： 许多病毒表面有血凝素，能与各种动物的红细胞表面受体结合，而出现红细胞凝集现象，简称为病毒的血凝现象 。2.HI试验： 病毒的红细胞凝集现象，可以被特异性免疫血清所抑制，称 HI试验。一、鸡新城疫的 血凝试验 (HA) 【材料】
2、新城疫病毒鸡胚接种尿囊液 1份 0.5鸡血球悬液 1管 生理盐水或 PBS 1瓶 96孔微量血清盘 1块 微量加样器 1支一、鸡新城疫的 血凝试验 (HA) 【 方法与步骤 】（一）制备鸡红细胞悬液：1.用注射器抽取抗凝剂。 2.用上述注射器，采用无菌法抽取健康的未免疫鸡的静脉血。3.混匀，加生理盐水适量，洗涤离心，共离心三次（第一、二次 2000转 /分 5分钟、第三次 3000转 /分 5分钟）洗去血清及白细胞。 取纯红细胞 0.6ml，加生理盐水稀释 99.4ml，即成 1%的鸡红细胞悬液。一、鸡新城疫的 血凝试验 (HA)（ 二）加样1. 在 96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加 5
3、0L生理盐水。2. 于左侧第 1孔加 50L病毒液，混合均匀后，吸50L至第 2孔，依次倍比稀释至第 11孔，吸弃 50L；第 12孔为红细胞对照。3. 自右至左依次向各孔加入 0.5% 鸡红细胞悬液 50L，在振荡器上振荡，室温下静置后观察结果。一、鸡新城疫的 血凝试验 (HA) 【病毒血凝试验的操作方法（单位： L）】 孔 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12病毒稀释度 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048 对 照生理盐水50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
4、病毒液 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 0.6%红细胞50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50微型振荡器 1min，静置 30min 弃 50结果观察 + + + + + + + + + + - -以 100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位一、鸡新城疫的 血凝试验 (HA) 【 结果判定 】 置于振荡器上振荡 1分钟，静置后 30 min开始观察结果，待对照孔红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集，沉于孔底，平铺呈网状，即为 100% 凝集（ +），不凝集者（ -）红细胞沉于孔底呈点状。 以 100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位。从表 4-1看出，该新城疫病毒液的血凝价为 1:128，则 l:128为1个血凝单位， 1:64、 l:32分别为 2、 4个血凝单位，或将 128/4=32，即 1:32稀释的病毒液为 4个血凝单位。 二、鸡新城疫的 血凝抑制试验(HI) 【材料】除血球凝集试验所用材料外，血清取鸡免疫血清。
