1、第四节 黄酮类化合物的检识与结构鉴定目前主要采用的方法有： 与标准品或与文献对照 PPC或 TLC得到的 Rf或 hRf值（ Rf100） 分析对比样品在甲醇溶液中及加入诊断试剂后得到的 UV光谱 1H -NMR 13C -NMR MS一、色谱在黄酮类鉴定中的应用一、色谱在黄酮类鉴定中的应用1. 纸层析纸层析 (PPC)n 苷类成分可采用双向展开，第一相展开采用苷类成分可采用双向展开，第一相展开采用醇性溶剂，如醇性溶剂，如 BAW系统（正丁醇：系统（正丁醇： 醋酸：醋酸：水水 4： 1： 5上层）；第二相展开用水性溶剂上层）；第二相展开用水性溶剂，如氯仿：醋酸：水（，如氯仿：醋酸：水（ 3：
2、6： 1）苷元则多采用醇性溶剂。苷元则多采用醇性溶剂。花色苷及其苷元，可用含盐酸或醋酸的溶剂花色苷及其苷元，可用含盐酸或醋酸的溶剂。n 显色剂：显色剂： 2%三氯化铝甲醇液（紫外光下检三氯化铝甲醇液（紫外光下检测）；测）； 1%FeCl3 / 1%K3Fe(CN)6(1:1)混合液混合液。2. 薄层层析薄层层析 (TLC)）硅胶薄层）硅胶薄层用于弱极性黄酮较好。用于弱极性黄酮较好。常用甲苯：甲酸甲酯：甲酸（常用甲苯：甲酸甲酯：甲酸（ 5： 4： 1）；苯：甲醇（；苯：甲醇（ 95： 5）或苯：甲醇：冰醋）或苯：甲醇：冰醋酸（酸（ 35： 5： 5）等。）等。）聚酰胺层析n 适用范围广，可分离含
3、游离酚羟基或其苷类。n 常用展开系统：乙醇：水（ 3： 2）；丙酮：水（ 1： 1）等。二、紫外光谱在黄酮类鉴定中的应用二、紫外光谱在黄酮类鉴定中的应用n 可用于确定黄酮母核类型及确定某些位置是否含可用于确定黄酮母核类型及确定某些位置是否含有羟基。有羟基。n 一般程序：一般程序： 测定样品在甲醇中的测定样品在甲醇中的 UV谱以了解母核类型；谱以了解母核类型； 在甲醇溶液中分别加入各种诊断试剂后测在甲醇溶液中分别加入各种诊断试剂后测 UV谱谱和可见光谱以了解和可见光谱以了解 3,5,7,3,4有无羟基及邻二酚羟有无羟基及邻二酚羟基；基； 苷类可水解后（或先甲基化再水解），再用上苷类可水解后（或先
4、甲基化再水解），再用上法测苷元的法测苷元的 UV谱以了解糖的连接位置。谱以了解糖的连接位置。（一）黄酮类化合物在甲醇溶液中的紫外光谱（一）黄酮类化合物在甲醇溶液中的紫外光谱n 多数黄酮类化合物由两个主要吸收带组成：多数黄酮类化合物由两个主要吸收带组成：带带 I在在 300-400nm区间，由区间，由 B环桂皮酰系统的电环桂皮酰系统的电子跃迁所引起。子跃迁所引起。B B带带 II在在 240-285nm区间，由区间，由 A环苯甲酰系统环苯甲酰系统的电子跃迁所引起。的电子跃迁所引起。AA带 II(240-285nm)（ 苯甲酰系统）带 I(300-400nm)桂皮酰系统类 型 说 明250-285304-350 黄酮类-OH越多，带I带 II越红移B环 3,4有 -OH基，带 II为双峰（主峰伴肩峰）328-357 黄酮醇类(3-OR)352-385 黄酮醇类(3-OH)245-270270-295300-400 异黄酮类二氢黄酮（醇）B环上有 -OH, OCH3对带 I影响不大220-270340-390或 340-390(Ia)300-320(Ib)查耳酮类 查耳酮 2-OH使带 I红移的影响最大370-430(3-4个小峰 )橙酮类 不不同同类类型型黄黄酮酮类类化化合合物物的的紫紫外外光光谱谱2加入诊断试剂后引起的位移及结构测定加入诊断试剂后引起的位移及结构测定
