1、分子医学技能分子医学技能张 彦TEL: 87330621Department of biochemistry & molecular biology质粒质粒 DNA的制备的制备 、 鉴定鉴定内切酶切割重组质粒内切酶切割重组质粒（ p70、 p81）一、概述一、概述什么是质粒（什么是质粒（ plasmid）质粒是质粒是 存在于细菌体内存在于细菌体内 的一类独立于染色的一类独立于染色体的可以体的可以 自主复制自主复制 的双链环状的双链环状 DNA， 在细胞内在细胞内它们常以它们常以 共价闭环共价闭环 的超螺旋形式存在。的超螺旋形式存在。 质粒质粒 DNA的一般特性的一般特性 ： 质粒是细菌内的共生
2、型遗传因子有相对独立性。质粒是细菌内的共生型遗传因子有相对独立性。 它能在细菌中垂直遗传并赋予宿主细胞一些表型它能在细菌中垂直遗传并赋予宿主细胞一些表型 。 是双链闭合环状是双链闭合环状 DNA， 分子量大小不等。分子量大小不等。质粒质粒 DNA与宿主菌染色体与宿主菌染色体 DNA的两点不同的两点不同： 宿主菌染色体宿主菌染色体 (chromosome)DNA通常比质粒通常比质粒DNA要大得多。要大得多。 纯化分离的宿主菌纯化分离的宿主菌 DNA多为线性分子，而质多为线性分子，而质粒粒 DNA呈闭合环的形式。呈闭合环的形式。 提取提取 质粒质粒 DNA的目的与意义的目的与意义 是基因克隆 (g
3、ene clone)的第一步（分离得到转运目的基因的载体）； 为基因重组 (gene recombination)作准备； 质粒可以直接转化 (transform)细胞； 为目的基因 (target gene)的表达提供条件。基因载体（ gene vector） 什么是基因载体什么是基因载体把一个有用的目的把一个有用的目的 DNA片断通过重组片断通过重组 DNA技术，技术，送进受体细胞中去进行复制和表达的工具送进受体细胞中去进行复制和表达的工具 基因载体的作用基因载体的作用 为目的基因提供进入受体细胞的转移能力为目的基因提供进入受体细胞的转移能力 为目的基因提供在受体细胞中的复制（或整为目的基
4、因提供在受体细胞中的复制（或整 合）和表达合）和表达 所需条件所需条件基因载体应具备特点基因载体应具备特点 : 具有独立复制能力，具有独立复制能力， 在细胞中能大量繁殖，从而使目的基因大量扩增，从而使目的基因大量扩增 具有适当的限制性内切酶识别和切割位点具有适当的限制性内切酶识别和切割位点 具有供筛选用的遗传标记具有供筛选用的遗传标记 作为表达载体应能利用宿主的酶系统，表达作为表达载体应能利用宿主的酶系统，表达目的基因目的基因 相对分子量小相对分子量小 细胞内稳定性高细胞内稳定性高 可转移性可转移性基因载体类型基因载体类型 质粒，噬菌体质粒，噬菌体 (phage)， 病毒病毒 (virus)DNA
