1、实验九 血清总胆固醇的测定1 实验目的 掌握血清胆固醇测定在健身运动中的应用价值； 了解影响血清胆固醇测定准确性的主要环节。2 实验原理再与同样处理的胆固醇标准溶液在 546nm波长下比色测定，即可求样品中总胆固醇的含量。 胆固醇是一种仅含于动物性食物中的固醇类物质。正常浓度生理范围内，它是维持人体新陈代谢不可缺少的原料，也是抗老防衰、延年益寿的重要物质。 胆固醇影响食物中摄取和体内生物合成，大多由肝脏合成。血清胆固醇值取决于摄取后被吸收的量，在体内合成的量与利用的量，以及从十二指肠排出后再吸收和粪便中排泄量的平衡。血清胆固醇不受一次性的膳食和运动的影响（血液浓缩是有影响的），在短期内，不易受
2、膳食内容的变化和运动的影响。 血清总胆固醇测定方法很多，有称量法、比蚀法、碘量法、层析法与比色法等。而以分光光度法用得最多。分光光度法则又因所用显色剂不同而有各种不同的方法。 目前常用的有醋酐 -硫酸显色法和三氯化铁 -硫酸法。前者虽操作简便快速，但显色稳定性较差，血清色素的干扰较大，后者灵敏度高，显色稳定，较醋酐 -硫酸法优越。 在胆固醇的比色分析中，一类是先经抽提、分离；然后再是显色定量。另一类是直接向血清中加入显色剂。由于胆固醇的呈色反应特异性较差，直接测定往往受血清中其它因素的干扰，故测得结果不如先抽提、分离后再显色的准确。 血清经无水乙醇处理后，蛋白质被沉淀，上清液中胆固醇与浓 H2
3、SO4及 Fe3+作用，生成较稳定的紫红色化合物。再与同样处理的胆固醇标准溶液进行比色，即可求总胆固醇的含量。3 实验器材与试剂血清总胆固醇测定试剂盒，分光光度计，水浴锅，离心机，离心管，移液枪，采血针，采血管，酒精，棉签。4 实验方法与步骤 采集少量指尖血液于 0.2ml离心管中， 5000rpm离心 10分钟，用移液枪小心吸取上清液按下表加入测定试剂盒试剂。加入物（ l） 空白管 标准管 测定管蒸馏水 3.0 标准液 3.0 表 3-13血清总胆固醇测定试剂盒的操作血清 3.0试剂 300.0 300.0 300.0蒸馏水 1000.0 1000.0 1000.0混匀，置于 37 水浴 6分钟，以空白管调节零点，分别测定标准管和测定管的吸光度值。冷至定温后（不超过 2小时），用546nm波长，以空白管校正零点，读取各管吸光度。 计算 ：正常参考值： 2.33 5.69mmol/L（ 90 220mg/dl）5 注意事项胆固醇的显色反应受水分和温度的影响，因此，所用的试管、吸管比色杯均须干燥。
