1、 1 生物药物分析练习题 一、 名词解释： 生物药物分析： 应用微生物学、分子生物学、免疫学、生物化学、有机化学、数学、分析化学、生化工程等学科的理论及其技术成就，检测和研究各种生物药物质量的一门综合性学科。 生物药物： 指的是生物体生命活动过程中产生的，或者通过生物技术加工的，用作疾病的诊断、预防、治疗的初级和次级代谢产物，包括微生物药物、基因工程药物、动植物细胞组织制备的生化药物。 药品标准： 是指国家对药品的质量规格及其检验方法所做的技术规定，是药品的生产、流通、使用及检验、监督管理部门共同遵守的法定依据 。 药典 ：一个国家记载药品标准，规格的法典，一般由国家药品监督管理局主持编撰颁布
2、实施，具有法定约束力。 基因工程药物： 是先确定对某种疾病有预防和治疗作用的蛋白质，然后将控制该蛋白质合成过程的基因取出来，经过一系列基因操作，最后将该基因放入可以大量产生的受体细胞中去，在受体细胞不断繁殖的过程中，大规模生产预防和治疗这些疾病的蛋白质。 药物杂质 ：药物中存在的无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效，甚至对人体健康有害的物质。 面积归一法： 计算各杂质峰面积及其总和，并求出占总峰面积的百分率以测定杂质含量。 内消 法： 是指将一定重量的纯物质作为内标物加到一定量的被分析样品混合物中，然后对含有内标物的样品进行色谱分析，分别测定内标物和待测组分的峰面积及相对校正因子，按相应公式和方
3、法即可求得被测组分在样品中的百分含量。 外消法： 用已知不同含量的标样系列等量进行分析，然后做出响应信号与含量之间的关系曲线。定量分析样品时，在测校正曲线相同条件下进同等样量的等测样品，从色谱图上测出峰高或峰面积，在从校正曲线查出样品的含量。 微生物限度检查法 ： 系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法。 放射性免疫 测定法： 利用免疫学上的抗原 -抗体高度特异性反应与放射性同位素测量技术的高度灵敏性相结合的超微量分析方法。 酶免疫测定法： 利用抗原和抗体的免疫学反应和酶的高效催化作用来测定抗原或抗体含量的技术。 抗血清的滴度酶免竞争法： 非竞争法 均相法 ： 是指不需
4、要将结合的与游离的酶标志物分离便可测定的方法。 非均相法： 是指抗原抗体反应后，需要将结合的与游离的酶标志物分离才能测定的方法。 酶的交联 液相酶免疫测定法 酶分析： 指利用酶作为分析工具来测定特定物质量的方法。（ P97） 终点法： 指借 助酶反应使被测物质定量地进行转变，在转化完成后，测定底物、产物或辅酶物质等的变化量的方法。 反应速度法： 是指通过测定酶促反应速度对被测物质进行定量的方法。（ P104） 酶循环放大法 : 指利用底物的专一性，使微量的底物“增幅放大”以达到定量目的的方法。（ P107） 电泳： 指带电粒子或离子在电场作用下的定向移动，依据带电粒子在电场的作用下迁移行为不同
5、进行分离的技术。（ P111） 电渗 :液体的涌动现象。（ P113） 2 电泳迁移率 ：带电粒子在单位电场强度下移动的泳动速度。 SDS PAGE： 向 样品加入还原剂和过量 SDS， SDS 是阴离子去垢剂，是蛋白质变性解聚，并与蛋白质结合成带强负电荷的复合物，掩盖了蛋白质之间原有电荷的差异，是各种蛋白质的电荷 /质量比值都相同，因而在聚丙酰胺凝胶中电泳时迁移速率主要取决于蛋白质分子大小。是分析蛋白质和多肽、测定其分子量等常用的方法。 梯度聚丙稀酰胺凝胶电泳 比移值 ：色谱法中原点到斑点中心的距离与原点到溶剂前沿的距离的比值。 等电聚焦： 利用蛋白质分子或其他两性分子等电点的不同，在一个稳
6、定的、连续的、线性的pH 梯度中进行蛋白质的分离的一种电泳方法。（ P126） 两性载体 色谱法： 指借助物质在两相间分配原理的不同，而使混合物中各组分分离的技术。（ P131） 边缘效应： 指板层中部斑点的 Rf 值小于两侧斑点的 Rf 值的现象。（ P137） 放射性比度 ：单位质量或单位体积的放射性物质的放射性活度。 分离度： 用以判断分离物质在色谱柱中的分离情况，常用为柱的总分离效能指标。 托尾因子 ：是通过计算 5%峰高处峰宽与峰顶点至前沿的距离比来评价峰形的参数，目的是为了保证色谱分离效果和测量精度，常用 T 来表示。 牛津单位： 在标准情况下，能完 全抑制 50mL 肉汤培养液中
7、的金黄色葡萄球菌标准菌株生长的青霉素最低含量为一个牛津单位。（ P159） 稀释单位： 指能完全抑制 1mL 肉汤培养液中大肠杆菌标准菌株生长的最低含量。 重量单位： 指以抗生素的生物活性部分的重量作为效价单位。（ P160） 旋光性 ：当光通过含有某种物质的溶液时，使经过此物质的偏振光平面发生旋转的现象。 比旋度 ：指偏振光通过长 1dm 且每 1ml 含旋光物质 1g 的溶液，在一定额波长和温度下的旋光度。 稀释法 比浊法 琼脂扩散法（管碟法） 生物检定： 指利用药 物对生物体所引起的药理作用来测定药物的生物活性或效价的一种方法。（ P210） 容量分析法： 依据已知浓度的标准试剂溶液与被
8、测定的一定量供试品药物完全作用所消耗的标准试剂的体积，来计算被测定药物中有效物质含量的方法。（ 224） 直接滴定法： 是用标准溶液直接滴定被测物质的一种方法。 （ P224） 逆滴定法 ：指加入定量且过量的滴定剂使之与待测物质反应，然后用另外的试剂滴定过量的滴定剂，进而对待测物质进行定量的方法。 维生素： 指一类维持人体正常生理代谢功能所必需的低分子有机化合物 。（ p237 电位滴定法 ：指在滴定过程中通过测量电位变化以确定滴定终点的方法。 化学聚合 117 光聚合 ：利用光照加速化合物单位体之间共价链接的现象。 微分比容 ：当加入 1g 干物质于无限大体积的溶剂中时，溶液的体积增量。 茚
9、三酮反应： 双缩脲反应 :双缩脲在碱性溶液中与铜离子结合生成复杂的紫红色化合物。（ p277） 等电点： 在某一 pH 的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，所带净电荷为零，呈电中性，此时溶液的 pH 称为该氨基酸的等电点。 福林酚法 ：利用蛋白 质与福林酚试剂反应后形成的化合物可在 750nm 波长处测定其吸光度，以测定蛋白质含量的分析方法。 3 蛋白质换算系数 ：指含有 1g 氮的蛋白质重量，一般为 6.25. 甲醛滴定法 ：依据一分子氨基酸与两分子甲醛反应生成一个氢离子，在用已知浓度氢氧化钠滴定氢离子以确定氨基酸含量的方法。 非水滴定法： 在冰醋酸中用高氯酸标准溶液滴定测
10、定氨基酸含量的方法。 酶 ：是一种生物来源的特殊化学催化剂，即生物催化剂。是由生物细胞产生的具有催化能力的蛋白质。 酶的高效性 ：酶催化较一般催化反应速度高 1051013. 酶的绝对专一性 : 即一种酶仅能催化一种底物的生化反应。如脲酶只能催化尿素降解成氨和碳酸盐，即使是尿素衍生物也不能被脲酶水解。 酶的相对专一性 :即一种酶仅能催化相应的某一类化合物或具有某种化学键的物质的变化，如脂肪水解酶能分解脂肪，蛋白质水解酶分解蛋白质， a-淀粉酶可水解淀粉，这些酶不能相互调换。 酶的立体结构专一性 ：及底物有立体异构体时，酶只能以其中之一作为底物。 酶的活力 ： 酶催化一定化学反应的能力。 酶的活
11、力单位 ：酶的活性单位（ U）是酶活性高低的一种度量，用 U/g 或 U/ml 表 示。 酶的比活力 ：酶的比活力是指每毫克酶蛋白所含有的酶活力。用 U/mg 表示。 恒比活力 ： 多肽生长因子： （ 1976 年）定义：细胞生长因子是指在体内和体外对动物细胞或机体的生长有促进作用的物质，它们不是营养成分，主要由多肽构成，故称多肽生长因子。按现在细胞因子的作用性质进行定义：多肽调节因子实际上是一系列存在于机体内的，对机体有很强效应的细胞调节因子。 肽图分析 ：肽图分析可作为与天然产品或参考品作精密比较的手段。与氨基酸成分和序列分析合并研究，可作为蛋白质的精确鉴别。同种产品不同 批次的肽图的一致
12、性是工艺稳定性的验证指标。 蛋白质免疫印记法 ：将等电聚焦电泳后的蛋白质转移到硝酸纤维素纸上。免疫印迹的基本原理是借助聚丙酰胺凝胶技术，将生物活性物质高效分离，再与固相免疫学方法相结合。 细胞病变抑制法 ：该法主要用于干扰素的效价测定，采用 CPE 抑制为基础的抑制微量测定法。 H3 TdR 掺入法 ：通过比较待测样品与标准品之间对检测细胞促增殖能力的强弱来确定待测样品的活性。 微量酶检测法（ MTT） ：通过比较待测样品刺激检测细胞增殖能力的强弱来确定样品的活性。 生 物制品 ：生物制品系指以天然或人工改造的微生物、寄生虫、生物毒素或生物组织及其代谢产物等为起始原料，采用生物学、分子生物学或
13、生物化学、生物工程等相应技术制成，并以相应分析技术控制其中间产物和成品质量的生物活性制品，可用于某些疾病的预防、治疗和诊断。 异烟肼法 ：甾体激素 C3 上酮基及其某些其他位置上的酮基都能与常用的羰基试验如异烟肼、2， 4-二硝基苯肼及氨基脲等缩合反应产生有色物质，在一定波长下可比色，作为含量测定的依据，异烟肼是目前使用较广泛的一种。 激素 ：由内分泌细胞所产生的微量化学信息分子，这些物 质通过扩散或被血液转运到作用细胞或器官，从而调节细胞或器官的代谢，并有反馈性地调节机制以适应机体内环境的变化，也有协调体内各部分之间相互联系的作用。 保护指数 ：动物经抗原免疫后，其耐受活菌或活毒攻击相当于未
14、免疫动物所耐受量的倍数。 抗毒素单位 ：一个抗毒素单位定义为将抗毒素与一个 L+量（致死限量，指与一个国际单位抗毒素混合后在一定时间杀死一只规定体重动物的最小毒素量）的毒素作用后，注射小鼠仍能使该小鼠在 96h 左右才死亡的最小抗毒素量。 4 絮状单位 ：一个絮状单位定义为能与一个单位抗毒素首先发生 絮状沉淀反应的类毒素或毒素的量。 二、 问答题 1、 生物药物分析的基本任务有哪四个方面？ 答：（ 1）药检，包括原料药和制剂的检验。 （ 2）进行生产过程质量控制。 （ 3）进行运输储存质量控制。 （ 4）进行临床分析。 2、 中国药品质量标准分为哪几种？ 答：药典、部颁标准、地方标准。 3、
15、2000 年版中国药典的内容分为几部分？ 答：两部。一部收载中药材，中药成方制剂。第二部收载化学药品、抗生素、生化药品等。 4、 生物药物质量标准的特征是什么？ 答：权威性、科学性、进展性。 5、 试述生物药物检验工作的基 本内容？ 答： 1、学习分析生物药物的若干方法及新技术。 2、生物药物测定及药品检验。 3、体内药物分析 4、生物药品制品的标准制定。 6、 一般杂质检查遵循的原则是什么？费休法测水分的基本原理是什么？在平板菌落计数法中向培养基中加入 TTC 的原理是什么？ 如何鉴别大肠杆菌、沙门菌、绿脓杆菌？ 答： 1、平行操作原则，包括仪器的配对性及供试管与对照管的同步操作。 2、 原
16、理：利用碘氧化二氧化硫时需要一定量的水分参加反应，总反应式 H2O+I2+SO2+3C5H5N+CH3OH 2C5H5N HI+C5H5N HSO4CH3 3、细菌体内含有多种脱氢酶，进行氧化作用时释放出电子和氢离子，遇 TTC 指示剂菌落呈红色。在培养基中加入适量 TTC，既可限制细菌蔓延生长又便于计数。 7、 放射性免疫测定法中竞争法与非竞争法的原理分别是什么？抗血清的质量检定分为哪三个方面？影响抗体产生的因素是什么？ 答：竞争法：标记抗原 Ag+Ab Ag+Ab/AgAb+ +Ag F(多 )则待测抗原 /B则待测抗原。 非竞争法： Ag+Ab（过量） AgAb+ +Ab+ F（ Ab+
17、 ） 则 Ag/B(AgAb+) cpm,则Ag。 抗血清的质量检定分为亲和力、特异性、滴度。 影响抗体产生的因素：佐剂、剂量、免疫竞争。 8、 在酶免疫测定法中竞争法与非竞争法的原理分别是什么？它们分别有哪些类型？在酶免测定法中胰岛素测定实例。 答：竞争法：将待检抗原和酶标抗原与相应固相抗体竞争结合，标本中抗原越多，与固相抗体结合的酶标抗原越少，与底物反应生成的颜色越浅，因此根据颜色深浅可定量测定。 1、固相法 2、双抗体法 3、均相醇免疫测定 4、酶免疫制剂免疫测定。 非竞争法： 1、双抗体夹心法 2、免疫酶测定法 5 9、 酶免疫测定法中实验条件的建立包括哪五个过程？ 答：包被、洗涤、加
18、待测物、温育、检测。 10、 在酶免疫分析中终点法的条件和应注意的问题分别是什么？ 答：条件： 1、要有专一地作用该被测物质的酶。 2、能够确定使这种酶反应接近进行完全的条件。 3、反应中底物的减少，产物的增加、辅酶物质的改变等可以借助某种简便的方法进行测定。 注意问题： 1、酶的底物特异性 2、反应的平衡 3、反应液 4、反应产物的抑制。 11、 酶法分析有哪三种方法？ 答：终点法，反应速度法、 循环放大法。 12、 如何在一个比色杯中同时定量丙酮酸、磷酸烯醇式丙酮酸和 D 2 磷酸甘油酸？ 答：对于丙酮酸、磷酸烯醇式丙酮酸和 D-2-磷酸甘油酸共存的混合液来说，用乳酸脱氢酶作用时，由于乳酸
19、脱氢酶反应定量地向右方进行，因此根据 340nm 吸收度的减少便可以容易地算出丙酮酸含量。如像这种反应液中再加入丙酮酸激酶，使丙酮激酶反应与乳酸脱氢酶反应成偶联反应，则 NADH 的减少和磷酸烯醇式丙酮酸量成正比。如果进一步向该反应系统中加烯醇化酶，使烯醇化酶反应与丙酮激酶及乳酸脱氢酶偶联，那么此时NADH 减少与 D-2 磷酸甘油酸的量 成正比例。这样在一个比色杯内就能依次进行丙酮酸、磷酸烯醇式丙酮酸和 D-2-磷酸甘油酸的定量。 13、 如何在样品中同时测定葡萄糖和果糖？如何进行 G-1-P 的定量测定？ 14、 酶循环放大法的基本原理和注意事项分别是什么？酶循环放大法特点是什么？ 答：基
20、本原理：酶循环放大法是一种超微量分析方法，本分析法分为三步，第一步，转换反应：以试样中的待测组分为底物，经特异性反应生成与待测组分相当的定量循环底物。第二步，循环反应：生成的循环底物反复参加由两个酶反应组成的耦连反应，所得产物量为循环底物的若干倍。第三步，指示反应：采用酶法测 定反应产物。由反应产物量及循环次数，计算出循环底物量，再推算试样中待测组分的量。 注意事项： 1、 NAD 酸性稳定，碱性条件下 23 分钟被破坏， NADH 与之相反。 2、在循环反应中除循环底物外，其他物质是过量的。 3、用对照实验，用已知 NADH 求循环次数 n。 特点： 1、灵敏度高，能测定出 10 的负 18
21、 次方摩尔物质。 2、特异性高 3、循环效率高， 2 万次每小时。 4、测定物质灵活。 15、 电泳法的基本原理是什么？影响电泳迁移率的因素有哪些？ 答：原理：依据带带电粒子在电场作用下迁移行为的不同进行分离的方法。 因素：颗粒性质、电场强度，溶液性质、电渗、焦耳热、筛孔 16、 聚丙烯酰胺凝胶的制备方法有拿两种？它们的催化剂、加速剂是什么？ 答：化学聚合：催化剂，过硫酸铵或过硫酸钾。加速剂：脂肪族叔胺 光聚合：催化剂：核黄素。加速剂： TEMED 17、 聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理是什么？ 聚丙烯酰胺凝胶系统分为不连续电泳和连续电泳。不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳建立在区带电泳院里的基础上满意孔
22、径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物，采用电泳基质的不连续体系（即凝胶层、缓冲液离子成分、 ph 及电位梯度均不连 续），使样品在不连续的两相间集聚浓缩成很薄的起始区带，然后进行电泳。 18、 SDS PAGE 的基本原理是什么？ 答： 在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进 SDS（十二烷基硫酸钠）， SDS 会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合 SDS 的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此 SDS 多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到6 饱和的状态下，每克多肽可与 1.4g 去污剂结合。当分子量在 15KD 到 200KD 之间时，蛋白质的迁移率和
23、分子量的对数呈线性关系，符合下式： logMW=K-bX，式中： MW 为 分子量， X 为迁移率， k、 b 均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。 19、 影响 SDS 与蛋白质结合的因素有哪些？ （ 1）溶液中 SDS 单体的浓度（ 2）样品缓冲液的离子强度（ 3）二硫键是否完全被还原 20、 梯度聚丙烯酰胺凝胶的基本原理是什么？蛋白质染色的方法有哪五种？ 原理： 凝胶浓度由小变大，胶的孔径由大变小，在电泳开始时，由于凝胶孔径大，没有分子筛效应，此时电泳的迁移率与被分
24、离的物质所带电荷、形状 、分子量大小相关，随着电泳的进行，孔径越来越小，由分子筛效应产生的阻力越来越大，当阻力足以阻挡被分离物质向前移动时，被分离物质停留在相应孔径的凝胶中，此时只有分子筛效应，无电荷效应。所以物质分子的最后分离是依据分子筛效应分开，蛋白质的相对迁移率在一定范围内与蛋白质分子量的对数成线性关系。 方法 :1、氨基黑 10B 法 2、考马斯亮蓝 R250 法 3、考马斯亮蓝 G250 法 4、 1-苯胺基 -8-萘磺酸 5、银染色法 21、 色谱法的基本原理是什么？纸色谱的影响因素有哪些？ 原理：混合物中各组分在两相间进行分配， 其中一组是不动的，称为固定相；另一相是携带混合物流
25、过固定相的，称为流动相。当流动相中所含的混合物经过固定相时，就会与固定相发生作用，由于混合物中各组分在结构和性质上存在差异，他们与固定相发生作用的大小、强弱就有差异，因此，在同一条件下，不同组分在固定相中滞留时间不同，从而按先后不用次序从固定相中流出而得到分离。 影响因素：（ 1）物质极性的影响（ 2）溶剂的影响（ 3） ph 的影响（ 4）滤纸的影响（ 5）温度和时间的影响 22、 HPLC 的基本原理是什么？ HPLC 的色谱类型有哪几种？ 原理： HPLC 的流动相和固定相都是液体。 流动相与固定相之间应互不相溶，有一个明显的分界面。当试样进入色谱柱，溶质在两相间进行多次分配。从而使流出
26、时间不同，进而达到分离。 类型：正相色谱、反相色谱、离子交换色谱、凝胶色谱 23、 气相色谱的基本原理和类型分别是什么？ 原理：原理：混合物的分离依据色谱柱的性质和相关的保留或固定相的性质。利用被测物质各组分在不同两相间分配系数的微小差异，当两相做相对运动时，这些物质在两相之间进行反复多次的分配，使原来只有微小的性质差异产生很大的效果，而使不同组分得到分离。 类型：气 -固色谱法、气 -液色谱法 24、 抗生素的鉴别常用方法 有哪三类？ 物理方法、化学方法、生物学方法 25、 怎样进行抗生素类药物的鉴别？ 抗生素类药物的鉴别包括抗生素及其衍生物的鉴别。前者是鉴别抗生素的种属，后者是鉴别抗生素是
27、属何种盐类、脂类、复合物等。常用的鉴别方法有物理方法、化学方法、生物学方法。物理方法有紫外光吸收图谱、红外光吸收图谱、色谱分析及溶解度等。化学方法常用的有功能基团反应、特异性的橙色反应等。生物学方法利用特异的酶反应，如用青霉素在一定条件下水解青霉素，使其丧失抗菌活性，以此鉴别青霉素。 7 26、 如何鉴别氨基糖苷类抗生素？ （ 1） 呈色反应：茚三酮反应、坂口反应、糖类 试剂反应、埃尔松 -摩根反应、麦芽酚反应 （ 2） 薄层色谱 27、 测定青霉素中过敏原青霉噻唑衍生物的原理是什么？ 氧化汞与青霉噻唑衍生物形成 penamaldate 衍生物，衍生物在 285nm 处有吸收峰。可先通过凝胶过
28、滤分离青梅噻唑衍生物，以磷酸盐缓冲液位对照品，测定 285nm 处的吸收度，再与以青霉噻唑正丙胺为标准品所做的标准曲线作为对比，即可定量。 28、 抗生素的效价微生物测定方法有哪三种？管碟法测定生抗素的效价基本原理是什么 ？ 方法：稀释法、比浊法、琼脂扩散法 原理：管碟法测定生抗素的效价基本原理：利用抗生素在摊布特定试验菌的琼 脂培养基内扩散，形成含一定浓度的球型区，抑制了试验菌的繁殖，通过透明琼脂培养基，可观察到透明的抑菌圈；并且在一定的抗生素浓度范围内，对数浓度（剂量）与抑菌圈面积或直径成正比。方法设计是在同样条件下将已知效价的标准品溶液与未知效价的供试品溶液的剂量反应（抑菌圈）进行比较；
29、当标准品和供试品是属于同一性质的抗生素时，标准品溶液和供试品溶液，对一定试验菌所得的剂量反应曲线，在一定剂量范围内应相互平行。根据以上原理，可设计为一剂量法、二剂量法及三剂量法等，从而可以较为准确地测定供试品的效价。 29、 试述管碟法中影响抗生素 抑菌圈形状的因素及控制？ 1、稀释抗生素用的缓冲液的 ph 值、盐浓度的影响 2、制备琼脂培养基菌层，加菌时培养基温度的影响 3、测试用的器材洗净度的影响 4、双碟培养温度的影响 5、其他操作的影响 30、 试述管碟法中影响抗生素抑菌圈清晰度的因素及控制？ 1、实验菌的特性与数量 2、培养基的原材料品种与质量 3、调节培养基 ph 值或增加盐浓度可
30、使抑菌圈清晰 4、不适当延长双碟的培养时间 31、 量反应平行法测定生抗素的效价的实验设计类型有哪些？ 随机设计、随机区组设计、拉平方设计、交叉设计 32、 简述量反应平行法实验结果的可靠性分析？ 实验结果的 可靠性是以方差分析法测验，测验多组均数之间的差别是否显著。抗生素效价测定中，存在有 S（标准差）和 T 的差别，直线及平行线关系，剂量间和双碟间的关系。通过统计以上各组均数间的方差，以试品间、回归、剂间（列）、蝶间（行）等的方差与误差项（ S 平方）的比值（称 F 值），来确定各自差异的显著性程度和实验结果的可靠性，因此 F 值（ F 值 =该项方差 /误差项）可作为观察实验显著性程度的
31、一个指标。计算出的 F值，可通过 F 值表得知计算 F 值是处于 P0.05、 P0.01，差别无显著意义。 33、 抗生素类药物的含量测定的物理化学方法有哪几种类型？ 1、 容量法：酸碱滴定法、碘量法 2、 光谱学测定法 :旋光法、紫外分光光度法、比色法 3、 色谱测定法：洗脱法、直接测量法、生物自显法 4、 高效液相色谱法 34、 容量分析法分为哪几种类型？光谱分析法又分为哪几种类型？ 8 容量法：酸碱滴定法、碘量法 光谱学测定法 :旋光法、紫外分光光度法、比色法 35、 在抗生素的色谱分析中洗脱法哪三个步骤？ 答：斑点定位、洗脱、测量。 36、 维生素 C 的从哪三个方面进行鉴别？ 答
32、：利用还原性、利用糖类的性质、紫外分光光度法。 37、 维生素 C 的含量测定方法有哪些？其基本原理分别是什么？ 答： 1、容量分析法（碘量法， 2,6-二氯吲哚酚法， NBS 滴定法，比色法，紫外紫外分光光度法） 38、 如何进行的维生素 C 中铁和铜盐检查？ 铁盐检查：取本品 5.0g 两份，分别置 25ml 量瓶中，一份中加入 0.1mol/L 硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液（ B），另一份中加入标准铁溶液（精密称取硫酸铁铵 863mg，置 1000ml 量瓶中，加 1mol/L 硫酸溶液 25ml，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取 10ml，置 100ml 量瓶中，加水稀
33、释至刻度，摇匀） 1.0ml，加 0.1mol/ml 硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液（ A）。照原子吸收分光光度法，在 248.3nm 波长处分别测定，应符合规定。 铜盐检查：取本品 2.0g 两份，分别置 25ml 量瓶中，一份中加入 0.1mol/L 硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液（ B），另一份中加入标准铜溶液（精密称取硫酸铁铵 393mg，置 1000ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取 10ml，置 100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀） 1.0ml，加 0.1mol/ml 硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液（ A）。照原子吸收分光光
34、度法，在 324.8nm 波长处分别测定，应符合规定。 39、 如何判定纯 DNA 和 RNA？ 答：用紫外分光光度法测定 A260/A280来判定。纯 DNA 的比值应为 1.8，纯 RNA 为 2.0。 40、 嘌呤类药物如何进行鉴别？ 答： 1、戊糖的鉴别 2、嘌呤的鉴别 3、磷酸的的鉴别 4、特征吸收光谱 5、熔点鉴别 41、 嘌呤类药物的含量测定方法有哪两种？ 答： 1、紫外分光光度法 2、先经前处理 (如层析或电泳得到样品的斑点，然后剪下 )，再测定。 42、 氨基酸的生产制备方法有哪四种？ 答：水解 法，发酵法，酶转化法，化学合成法。 43、 氨基酸的 -氨基和 -羧基分别有哪些
35、主要反应？ 答： -氨基 ： 氨基酸与亚硝酸反应、氨基酸的氨基与酰基化试剂、烃基化反应、与甲醛反应 -羧基：成盐、成酯、成酰氯、成酰胺 44、 氨基酸的 -氨基和 -羧基同时参与的反应有哪些？ 答：与茚三酮反应、成肽反应 45、 氨基酸的 R 基团特殊反应有哪些？ 答： 1、络氨酸的酚基反应 2、组氨酸的侧链咪唑基于重氮苯磺酸反应形成红棕色化合物3、精氨酸的侧链胍基在硼酸钠缓冲液中与 1,2-环己二酮反应，生成缩合物 4、色氨酸的侧链吲哚基在温和条件下被 N-溴代琥珀酰亚胺氧化 5、半胱氨酸的巯基能打开乙撑亚胺的环，生成的侧链带正电荷。 46、 怎样进行 AA 的鉴别？ 答：旋光性、红外光谱、
36、紫外吸收、纸层析、茚三酮反应 47、 从哪几个方面鉴别蛋白质？ 9 答：颜色反应、福林酚反应或双缩脲反应、紫外吸收。 48、 茚三酮反应测 AA 有哪三种方法？ 答： Yemm 法、 Rosen 法、 Hydrindantin 法。 49、 AA 的含量测定有哪五种方法？其中非水滴定法的原理和种类分别是什么？ 答：茚三酮反应法、甲醛滴定法、非水滴定法、电泳法、色谱法、 原理：即溶剂的区分效应，本来在水溶液中不能滴定的弱酸或弱碱， 如果选择适当的溶剂使其强度增加，则可以顺利滴定氨基酸有氨基和羧基，在水中呈中性，在冰醋酸中就显出碱性，因此可用高氯酸等强酸进行滴定。 种类：直接滴定法、回滴法。 50
37、、 胰岛素的效价测定有哪三种方法？ 答：兔血糖法、小鼠血糖下降法，小鼠惊厥法 51、 简述酶的特性。 答： 1、酶是高效催化剂 2、酶对底物的结构具有严格的选择性 3、酶催化反应的反应条件温和 4、酶的催化活性在生物体内受到多种因素的调节。 52、 酶与底物复合物促进反应速度的原因是什么？ 答： 1、定向作用与底物浓缩 2、酶使底物分子变形 3、酸碱催化 4、共价催化 53、 米氏方程是什么 ？其中 Ks 与 Km 的意义分别是什么？求取 Vm 和 Km 的方法有哪两种方法？ 答： ， Ks 值称为 米氏常数 。 方法： Lineweaver-Burk 作图法，Langmuir 作图法。 54
38、、 影响酶催化速度的因素有哪些？ 答：底物浓度、酶浓度、抑制剂、激活剂、温度、 pH 值和离子强度 55、 酶除蛋白质的鉴别常用方法以外，还有哪三种鉴别方法？ 答、： 1、酶活 性实验 2、沉淀实验 3、动物实验 56、 简述如何测定胰蛋白酶中糜蛋白酶的含量。 答： 57、 用反应速度法测定酶类药物含量时，如何选择底物浓度、酶浓度和反应时间？ 答： 58、 酶反应的检测方法有哪三种？ 答： 1、容量分析法 2、气体检测法 3、分光光度法 59、 基因工程药物的质量控制包括哪几个方面？ 答： 1、原材料的质量控制 2、培养过程的质量控制 3、纯化过程的质量控制 4、最终产品的质量控制 60、 蛋
39、白质印迹法的基本过程是什么？ 答：聚丙烯酰胺凝胶电泳，转移电泳即将凝胶中的多肽条带转移到硝酸纤维素纸上，检测或鉴定薄膜上的多肽条带。 61、 多肽类药物的生 物效价测定的基本方法有哪四种？ 答 :1、免疫学测定法 2、细胞病变抑制法 3、 3H-TdR 掺入同位素法 4、微量酶检测法（ MTT法） 5、红细胞生成素 (EPO)体外活性测定法（ ELISA 测定法） 6、 EPO 体内生物学活性测定方法（网织红细胞计数法） 62、 粘多糖药物的鉴别和含量测定分别有哪几种方法？ 答：鉴别： 1、沉淀法 2、甲苯胺蓝染色 3、 SO42-鉴别反应 4、标准品对照法 10 含量测定： 1、理化分析法（
40、氨基己糖的测定、己糖醛酸的测定、总硫酸测定、重量法） 2、生物测定（抗凝血活性、活化部分凝血活素时间、凝血酶时间） 63、 激素类药物的含量测定有哪几种方法？ 答： 1、紫外分光光度法 2、四氮唑比色法 3、异烟肼法 4、 Kober 反应与铁 -酚试剂比色法5、高效液相色谱法 64、 有机碱性药物的酸碱滴定法有哪三种？ 答： 1、水溶液中碱的滴定 2、非水介质中的滴定 3、对碱的滴定 65、 环孢菌素的作用机制是什么？ 答：环孢菌素对 T 淋巴细胞有选择性的抑制作用，能够阻止抗原性刺激和调控性刺激的早期细胞应答反应。当环孢菌素与胞浆中的受体蛋白亲环素结合后，形成异源二聚体复合物，从而引发了免
41、疫抑制作用。该复合物随后与钙调磷酸酶结合，抑制了由 Ca2+所激活的丝氨酸 /苏氨酸磷酸酶的活性。 66、 生物制品质量控制的主要内容是什么？ 答： 1、生物制品的鉴别 2、生物制品的检测 (主要指纯度检测 )3、生物制品的含量测定。 67、 等电聚焦的基本原理是什么 ? 答：利用蛋白质分子或其他两性分子的等电点的不同在一个稳定的、连续的、线性的 pH梯度中进行分离的一种电泳方法。 在电泳介质中放入载体两性电解质，当通入直流电时，两性电解质形成一个由正极到负极逐渐增加的 pH 梯度，正极附近是低 pH 区，负极附近是高 pH 区。 在这个从正极到负极 pH 逐渐增加的直流电场中，当蛋白质带上不同性质和数量的电荷，向着一定 方向移动，迁移到与其相同的等电点位置上停留下来，即被聚焦于一个狭的区带中的分离。 68、 生物制品的热原检查有哪两种方法？ 答： 1、兔温法 2、鲎试剂法 69、 生物制品的效力测定包括哪四个方面？ 答： 1、免疫力实验 2、活菌疫苗的效力测定 3、抗霉素和类霉素的单位测定 4、血清学试验。
