1、 1 第二章基因工程复习题 一、选择题 1. 限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是 （ D） A 修复自身的遗传缺陷 B 促进自身的基因重组 C 强化自身的核酸代谢 D 提高自身的防御能力 2.生物工程的上游技术是 （ D） A 基因工程及分离工程 B 基因工程及发酵工程 C 基因工程及细胞工程 D 基因工程及蛋白质工程 3. 基因工程操作的三大基本元件是 :(I 供体 II 受体 III 载体 IV 抗体 V 配体 ) （ A） A. I + II + III B. I + III + IV C. II + III + IV D. II + IV + V 4. 多聚接头（ Polyl
2、inker ）指的是 （ A） A. 含有多种限制性内切酶识别及切割顺序的人工 DNA 片段 B. 含有多种复制起始区的人工 DNA 片段 C. 含有多种 SD 顺序的人工 DNA 片段 D. 含有多种启动基因的人工 DNA 片段 5.下列五个 DNA 片段中含有回文结构的是 （ D） A. GAAACTGCTTTGAC B. GAAACTGGAAACTG C. GAAACTGGTCAAAG D. GAAACTGCAGTTTC 6. 若将含有 5 末端 4 碱基突出的外源 DNA 片段插入到含有 3 末端 4 碱基突出的载体质粒上，又必须保证连接区域的碱基对数目既不增加也不减少，则需用的工具酶
3、是 （ D） I T 4 -DNA 聚合酶 II Klenow III T 4 -DNA 连接酶 IV 碱性磷酸单酯酶 A. III B. I + III C. II + III D. I + II + III 7.下列有关连接反应的叙述，错误 的是 （ A） A. 连接反应的最佳温度为 37 B. 连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于 10% C. 连接反应缓冲体系的 ATP 浓度不能高于 1mM D. 连接酶通常应过量 2-5 倍 8. T 4 -DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是 （ D） A. 2 -OH 和 5 P B. 2 -OH 和
4、3 -P C. 3 -OH 和 5 P D. 5 -OH 和 3 -P 9. 载体的功能是 (I 运送外源基因高效进入受体细胞 II 为外源基因提供复制能力 III 为外源基因提供整合能力 ) （ D） A. I B. I + III C. II + III D. I + II + III 10.克隆菌扩增的目的是 (I 增殖外源基因拷贝 II 表达标记基因 III 表达外源基因 ) （ D） A. I + II B. I + III C. II + III D. I + II + III 11. 下列各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中，错误的是 （ C） 2 A. 大肠杆菌繁
5、殖迅速 B. 枯草杆菌分泌机制健全 C. 链霉菌遗传稳定 D. 酵母菌表达产物具有真核性 12.考斯质粒（ cosmid）是一种 （ B） A. 天然质粒载体 B. 由 -DNA 的 cos 区与一质粒重组而成的载体 C. 具有溶原性质的载体 D. 能在受体细胞内复制并包装的载体 13. 某一重组 DNA （ 6.2 kb ） 的载体部分有两个 SmaI 酶切位点。用 SmaI 酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的 SmaI 酶切位点共有 （ D） A.4 个 B. 3 个 C. 2 个 D. 至少 2 个 14. 外源基因在大肠杆菌中以融合
6、蛋白的形式表达的优点是 (I 融合基因能稳定扩增 II 融合蛋白能抗蛋白酶的降解 III 表达产物易于亲和层析分离 ) （ D） A.III B. I + II C. I + III D. II + III 15.提高重组率的方法包括 (I 加大外源 DNA 与载体的分子之比 II 载体分子除磷 III 连接酶过量 IV 延长连接反应时间 ) （ A） A. I + II B. I + II + III C. I + III + IV D. II + III + IV 16.识别基因序列不同，但酶切后产生的粘性末端相同的一类酶为 （ B ） A.同工酶 B.同尾酶 C.同裂酶 D.同位酶 17
7、.pBR322 质粒作为基因克隆载体应有下列何种调控元件 （ ABD ） A.AmPr和 Tetr B.ori 复制子 C.LacZ 标记 D.多克隆位点 18.噬菌体外包装目的基因片段的大小应为 （ D ） A.小于噬菌体 DNA 的 50% B. 小于噬菌体 DNA 的 75% C.大于噬菌体 DNA 的 105% D.为噬菌体 DNA 的 75% 105% 19.DNA 连接酶的功能是 ( AB ) A.恢复 3 -OH 与 5 -P 之间的磷酸二酯键 B. 恢复缺口 C.恢复裂口 D.可使平末端与粘性末端连接 20.PUC 质粒作为基因克隆载体应有下 列何种调控元件 ( A B C D
8、 ) A.AmPr B.ori 复制子 C.LacZ 标记 D.多克隆位点 21.下列属于获取目的基因的方法的是 ( D ) 利用 mRNA 反转录形成从基因组文库中提取 从受体细胞中提取 利用 PCR 技术 利用 DNA 转录 人工合成 A. B. C. D. 22.的质粒分子带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因在基因工程中的主要作用是 B A提高受体细胞在自然环境中的耐药性 B有利于对目的基因是否导入进行检测 C增加质粒分子的分子量 D便于与外源基因连接 23. 有关基因工程的叙述正确的是 D A限制酶只在获得目的基因时才用 3 B重组质粒的形成是在细胞内完成的 C质粒都可作为运载体 D蛋白
9、质的结构可为合成目的基因提供资料 24.哪项不是基因表达载体的组成部分 ( B ) A.启动子 B.终止密码 C.标记基因 D.目的基因 25.下列哪项不是将目的基因导入植物细胞的方法 ( B ) A基因枪法 B显微注射法 C.农杆菌转化法 D花粉管通道法 26.以下说法正确的是 （ C ） A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 D、基因控制的性状都能在后代表现出来 27.不属于质粒被选为基因运载体的 理由是（ D ） A、能复制 B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环
10、状 DNA 28.有关基因工程的叙述中，错误的是（ A ） A、 DNA 连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、 限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、 人工合成目的基因不用限制性内切酶 29.有关基因工程的叙述正确的是 （ D ） A、限制酶只在获得目的基因时 才用 B、重组质粒的形成在细胞内完成 C、质粒都可作为运载体 D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 30.基因工程是在 DNA 分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （ C ） A、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合 C、将目的基因导入受体细胞 D、
11、目的基因的检测和表达 31.下列获取目的基因的 方法中需要模板链是（ B ） A.从基因文库中获取目的基因 B.利用 PCR 技术扩增目的基因 C.反转录法 D.通过 DNA 合成仪利用化学方法人工合成 32.下列有关基因工程的叙述中，错误的是 AC A 、 DNA 连接酶将粘性末端的碱基对连接起来 4 B、基因探针是指用放射性同位素或荧光分子等标记的 DNA 分子 C、基因治疗主要是对有缺陷的进行修复 D、蛋白质中氨基酸序列可为合成目的基因提供资料 二、 是非判断题 1.DNA 连接酶是一种能催化二条 DNA 链之间形成磷酸二酯键的酶，因此该酶既可修复基因序列中的缺口，也 可修复裂口。 （
12、） 2.质粒提取后，在琼脂糖电泳出现一条带时说明质粒提取纯度高，当为三条带时为纯度不高。（ ） 3、入噬菌体的插入型载体只有一个单一限制酶切点，替换型载体有 2 个成对的限制性酶切点。（ ） 4、原核细胞和真核细胞转录的 mRNA 均具有与 rRNA 结合的 SD 序列，以利于进行有效的转录。（ ） 5、 cDNA 文库是包含有细胞中所有 mRNA，因此该文库能包含细胞所有的遗传信息。（ X ） 1基因工程可改变生物或其分子的遗传物质（ ） 2通过限制性核酸内切酶和 DNA 连接酶等作用，在体外将不同来源的 DNA 片断重新组合成新的 DNA 分子 (重组 DNA)。（ ） 3基因的 “ 剪刀
13、 ” 是限制性内切酶（ ） 4基因的 “ 针线 ” 是 DNA 连接酶（ ） 5基因的 “ 运输工具 ” 是载体（ ） 6基因的 “ 剪刀 ” 是 DNA 连接酶（ ） 7基因的 “ 针线 ” 是限制性内切酶（ ） 8将目的基因与载体连接过程是由限制性内切酶来完成。（ ） 9. 将目的基因与载体连接过程是由 DNA 连连 接接 酶酶 来完成。（ ） 10. 通过基因 工程菌可生产胰岛素、人生长激素、干扰素等蛋白质药物。（ ） 三、 填空题 1、 在 LacI 标记基因插入外源基因，经 IPTG 诱导，在 X-gal 培养基中显 白 色，为 阳性 克隆，未插入基因的克隆显 蓝 色，为 阴 性克隆
14、。 2、 理想的质粒克隆载体应具备以下基本条件，如 能自主复制 、一种或多种限制酶的酶切位点 、 筛选标记 、 分子量小易拷贝 。 3、点突变 的基因系列在碱基替换中，若为一个嘌呤换成另一个嘌呤或一个嘧啶换成另一个嘧啶者称 转换 ，若一个嘌呤换成一个嘧啶或一个嘧啶换成一个嘌呤者称 颠换 。 4、基因表达的四大表达系统分别为 大肠杆菌 、 酵母菌 、 哺乳动物细胞 、 昆虫细胞 。 5、基因与载体的平末端连接方法有哪些 T4 连接酶连接法。 末 端核苷酸转移酶加同聚物尾巴后 ， 再用 DNA 连接酶进行连接；化学合成衔接物后连接 DNA 分子。 5、目的基因与载体连接方式有哪些 1) 粘性末端连
15、接； 2） 平头末端连接； 3） 人工接头法 ； 4） 同源多聚尾连接法 6、如何利用抗性标记基因筛选阳性克隆？ 抗性标记筛选；抗性基因插入失活筛选； LacZ 基因失活筛选。 7、 核酸操作的基本技术有哪些 核酸提取与纯化核酸的检测与保存核酸的凝胶电泳核酸分子杂交 8、 基因工程所需的基本条件 1、用于核酸操作的工具酶； 2、用于基因克隆的载体； 3、用于基因转移的受体菌或细胞。 5 9、 Klenow 酶在 有 dNTP 情况下，呈现 DNA 聚合酶活性，在 没有 dNTP 情况下呈现外切酶活性。 10、利用 PCR 技术扩增目的基因 概念： PCR 全称为 _聚合酶链式反应 _，是一项
16、在生物 _体外 _复制 _特定 DNA 片段 _的核酸合成技术 原理： _ DNA 复制 _ 条件： _已知基因的核苷酸序 列 _四种脱氧核苷酸 _一对引物 _、 _ DNA 聚合酶 _.前提条件： 方式：以 _指数 _方式扩增，即 _ 2n_（ n 为扩增循 环的次数） 结果使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 11 PCR 技术扩增过程 a、 DNA 变性（ 90 -95）：双链 DNA 模板 在热作用下， 氢键 断裂，形成 _单链 DNA b、复性（ 55 -60）：系统温度降低，引物 与 DNA 模板结合，形成局部 _双链 _。 c、延伸（ 70 -75）：在 Taq 酶的作用下，
17、从 引物的 5端 3端延伸，合成与模板互补的 _ DNA 链 _。 DNA 的 四种核酸的碱基分别是 : 胸腺嘧啶 、 胞嘧啶 、 腺嘌呤 和 鸟嘌呤 。 25在基因工程中应用的酶类统称为 工具酶 。 四、 名词解释 1.同尾酶 某些限制性内切酶识 别的碱基顺序不同，但酶切后产生同样粘性末端的两种酶 2.柯斯（ C0S）质粒 带有噬菌体的 COS 位点和整个 pBR322 的 DNA 顺序的大肠杆菌质粒。 3.SD 序列 为 mRNA 能在细菌核糖体上产生有效结合和转译的特殊序列。 4.质粒不亲和性：在没有选择压力的情况下，两种不同质粒不能够在同一宿主细胞系中稳定地共存的现象。 5.cDNA
18、文库：是指某生物某一发育时期所转录形成的 cDNA 片段与某种载体连接而成的克隆的集合。 6.穿梭质粒载体：指一类由人工构建的具有两种不同复制起点的选择标记，因而可在两种不同宿主细胞中存活和复制的质粒载体。 7.基因 (gene) 具有特定功能的 DNA 片段，这些片段有的编码蛋白质，有的编码 rRNA、 tRNA，有的则是与复制、转录调控有关的 DNA 序列。 8.基因重组 : 由于不同 DNA 链的断裂和连接而产生 DNA 片段的交换和重新组合，形成新 DNA分子的过程。 9.基因工程又叫做基因拼接技术或 DNA 重组技术。 是在生物体外，通过对 DNA 分子进行人工 “ 剪切 ” 和 “
19、 拼接 ” ，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产 生出人类所需要的新的生物类型和生物产品 10.目的基因 (objective gene)：又叫靶基因 (target gene)，是指根据基因工程的目的 ,设计的所需要的某些 DNA 分子片段，它含有一种或几种遗传信息的全套密码 (code) 6 11. 基因表达 基因表达 (gene expression)是指细胞在生命过程中 ,把储存在 DNA顺序中遗传信息经过转录和翻译 ,转变成具有生物活性的蛋白质分子 .生物体内的各种功能蛋白质和酶都是同相应的结构基因编码的 . 12. 双功能
20、抗体 将识别效应细胞的抗体和识别靶细胞的抗 体联结在一起 ,制成双功能性抗体 ,称为双特异性抗体 .如由识别肿瘤抗原的抗体和识别细胞毒性免疫效应细胞 ( CTL 细胞 , NK 细胞 , LAK 细胞 )表面分子的抗体 ( CD3 抗体或 CD16 抗体 )制成的双特异性抗体 ,有利于免疫效应细胞发挥抗肿瘤作用 . 五 问答题 1.真核细胞基因组中的基因常有内含子存在，能否在原核细胞中表达？能，为什么？不能，为什么？ 不能，因为原核细胞缺乏对真核基因中内含子的剪接功能和转录后加工系统。原核生物必须有相应的原核 RNA 聚合酶可识别原核细胞的启动子 , 以催化 RNA 的合成。 基因表达是以操纵
21、子为单位，操纵子由数个相关的结构基因和调控功能的部位组成的。因此在构建原核表达载体时必须有 1 个强的原核启动子及其两侧的调控序列。 2.质粒单酶切点的基因连接如何降低本底和防止自我环化和提高连接效率？ 目的基因片断与载体由相同的单一限制性核酸内切酶（如 EcoRI）消化酶切后 , 两者的两端均具有相同的粘性末端 , 称为单酶切点的粘性末端 , 又称全同源性粘性末端 高背景 载体经单一限制性核酸内切酶切割后 , 载体分子易于自我环化 , 既不利于目的基因的重组连接 , 大大降低阳性克隆效率 , 又可使非 重组性载体造成高背景。为了防止载体的自我环化，通常用碱性磷酸酶去除载体粘性末端的 5 -P
22、 以抑制 DNA 的自我环化。在连接反应中 , 具有 5 -P，的目的基因 DNA 片断可有效地与去磷酸化质粒 DNA 载体通过粘性末端发生互补连接 , 尽管产生的重组 DNA 分子于连接点含有两个缺口的开环分子 ,尽管在转化时其转化效率高于线性低于闭和环 , 但转化大肠杆菌后 ,在菌体内其缺口可获得修复。 双向插入 经单一限制核酸内切酶（如 EcoRI）切割的目的基因和载体 , 因二者的粘性末端是相同的 , 因此在连接反应中 , 目的基因可发生双向插入 , 载体对目的基因表达是有方向的 , 而目的基因可双向与之相连 , 这种连接若以克隆目的基因片段为目的没有影响 , 若以表达为目的 , 我们
23、就要对插入的片段进行方向鉴定 , 因目的基因由起始密码子向终止密码子方向表达是定向转录的 , 一旦启动子与目的基因编码顺序方向相反就不能正确转录目的基因的mRNA。若构建表达 DNA 重组体选用双酶切切割目的基因和载体，可使目的基因与载体的连接发生定向连接重组 , 以便定向克隆。 3.将外源性 DNA 克隆到 -LacZ 区段的插入型噬菌体上后，如何筛选重组噬菌体？ -半乳糖苷酶失活的插入 型载体，在其基因组中含有一个大肠杆菌的 lacZ 区段，此区段编码有 -半乳糖苷酶基因 lacZ，在诱导物 IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）存在下， -半乳糖苷酶能作用 X-gal(5-溴 -4-氯 3-吲哚
24、 - -D-半乳糖苷 )形成蓝色化合物（ 5-溴 -4-氯靛蓝）。这样由这种载体感染的大肠杆菌 lac-指示菌（ lac 基因缺陷菌），涂布在补加有 IPTG和 X-gal 的培养基平板上，会形成蓝色的噬斑，但若在 lacZ 区段上插入外源 DNA 片段，就会阻断 -半乳糖苷酶基因 lacZ 的编码序列，这种重组体感染的 lac-指示菌由于不能合成 -半乳糖苷酶，只能形成无色的噬菌斑，相反未发生外源基因插入则出现蓝色噬菌斑，以利筛选。 4.基因与载体的平末端连接方法有哪些？简要或图示说明均可。 （ 1） T4DNA 连接酶法 连接平末端 DNA 分子的方法有 2 种，一种是直接用 T4连接酶连
25、接，另一种是先用末端7 核苷酸转移酶给平末端 DNA 分子加上同聚物尾巴之后再用 DNA 连接酶进行连接。 T4DNA 连接酶同一般的大肠杆菌 DNA 连接酶不同。 T4DNA 连接酶除了能够封闭具有 3 -OH和 5 -P 末端的双链 DNA的缺口之外 ,在存在 ATP和加入高浓度酶的条件下 ,它还能够连接具有完全配对 碱基的平末端 DNA 分子 ,但其连接效率比粘性端要低的多。 （ 2） 同聚物加尾法 运用末端核苷酰转移酶，能够将核苷酸（通过脱氧核苷三磷酸前体）加到 DNA 分子单链延伸末端的 3 -OH 基因上 ,它并不需要模板链的存在 ,它一个一个加上核苷酸 ,构成由核苷酸组成的尾巴
26、,长度可达 100 个核苷酸。 5.如何从所克隆到基因重组体中鉴定目的基因的存在和正确性？ 根据插入基因的遗传性状进行筛选 只有当已知需克隆基因所编码蛋白质的功能 , 且该蛋白质又为细菌的生命活动所必需时 , 即可用该方法筛选。如：已知蛋白质中的亮氨酸（ Leu）为 Leu 营养缺陷菌所必需 , 当外源目的基因可表达亮氨酸 , 将该基因的重组子转入 Leu 缺陷菌中 , 在不含亮氨酸的基本培养基平板中 , 只有重组子表达的亮氨酸才能被 Leu 缺陷菌所利用而能生长繁殖 ,形成菌落。因而能生长的细菌集落，均为阳性的重组子克隆，而无该重组子的 Leu 缺陷菌在不含亮氨酸的平板上则不能生长，不能形成
27、菌落。 根据重组子的结构特征筛选 (1). 重组子大小鉴别筛选 重组子中因装有一段较大分子量的外源基因 DNA, 因此其分子量明显比原载体大得多 , 因此可从平板上挑取菌落分别提取重组载体（如质粒重组子）和原载 体（质粒），无需用限制性内切酶消化，直接进行凝胶电泳，携带外源性目的基因的重组子质粒因分子量大，电泳迁移率较小，其电泳条带在后，而原载体质粒因分子量较小，电泳迁移率较大，其电泳条带在前。通过比较可初步判断重组子中是否插入外源基因片段。本方法适用于插入片段较大的重组子的初步筛选。 (2). 酶切鉴定 对于筛选出的具有重组子的菌株，应经小量培养后，再分别提取原载体或重组体载体（重组质粒或重
28、组噬菌体 DNA），根据已知重组时外源基因两端的酶切位点，分别用相应的两种内切酶进行酶解，经琼脂糖电泳后，原载体因无外源性目的 基因，切开后变成线性，电泳呈一条带，若载体上有外源性目的基因插入，切开后电泳出现两条带：一条为载体质粒线性条带，一条为释放出的插入基因片断的小分子条带，这样就可以看出载体中是否有插入的目的基因片断，以及由 DNA marker 条带对比分析可得知插入基因片段的大小 (3). 目的基因序列测定 6.基因工程诞生的理论基础是什么？ 是现代分子生物学领域理论上的三大发现和技术上的三大发明。 理论上的三大发现： 证实了 DNA 是遗传物质 揭示了 DNA 分子的双螺旋结构模型
29、和半保留复制机理 遗传密码的破译和遗传信息传 递方式的确定 技术上的三大发明： 限制核酸内切酶的发现与 DNA 切割 DNA 连接酶的发现与 DNA 片段的连接 基因工程载体的研究与应用 7.如何有效地提高外源基因的表达效率？ 提高启动子强度 缩短启动子同克隆基因间距离 高效的翻译起始序列 高效的转录终止区 提高质粒拷贝数及稳定性 用以下方法提高翻译水平：调整 SD序列与 AUG间的距离用点突变的方法改变某些碱基增加 mRNA的稳定性的 减轻细胞的代谢负荷：诱导表达表达载体的诱导复制 提高表达蛋白的稳定性，防止其降解：克 隆一段原核序列，表达融合蛋白采用某种突变菌株表达分泌蛋白质 8 8.大肠
30、杆菌作为基因工程受体菌的优缺点是什么 ？ 优点：大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉，基础生物学、分子遗传学等方面的背景知识清楚，对其基因表达调控的分子机理也比较了解，而且历经二十年的基因工程实践，大肠杆菌已发展成为一种安全的基因工程实验体系，有多种适用的寄主菌株和载体系列，大肠杆菌易于进行工业化批量生产。 缺点：在通常情况下，细菌的 RNA 聚合酶不能识别真核的启动子；许多真核基因的蛋白质产物需要经过翻译后的加工修饰，如正确的折叠和组装， 而细菌中通常并没有这样的修饰机制，从而可能导致真核基因在大肠杆菌中的翻译产物无法产生有活性的蛋白；外源真核基因所表达的蛋白质分子往往能够被细菌的蛋白酶识别
31、，并被当做“异已分子”降解掉。 9.什么是 -互补筛选 ？ 质粒载体具有 -半乳糖苷酶基因（ lacZ），当外源 DNA 插入到它的 lacZ，可造成表达后的 -半乳糖苷酶失活，利用这一点就可以通过大肠杆菌转化子菌落在添加有 X-gal-IPTG培养基中的颜色变化鉴别出重组子和非重组子。有些大肠杆菌上带有 lacZ 基因的部分编码序列，质粒载体中含有别一部分编码序列，当 质粒转入载体后，可形成具有酶活性的蛋白质。这种 lacZ 基因上缺失了一部分编码序列的突变体与带有这一部分编码序列的突变体之间实现互补的现象叫互补。 10.真核细胞基因结构和原核细胞的有何相同点和不同点？ 1）相同点： 都是由
32、能够编码蛋白质的编码区和具有调控作用的非编码区组成。 2）不同点： 原核细胞基因的编码区是连续的，真核细胞基因的编码区是间隔的，不连续的。 11.基因克隆常用的载体必须具备的基本条件？ 具有独立复制能力 具备多个限制酶的识别位点 (多克隆位点 ) 具有遗传表型或筛选标记 有足够的容量以容纳外源 DNA 片段 可导入受体细胞。 复习题 2 基因重组与基因工程 一、 A 型题 1.实验室内常用的连接外源性 DNA 和载体 DNA 的酶是： （ A ） A DNA 连接酶 B DNA 聚合酶 C DNA 聚合酶 D DNA 聚合酶 E反转录酶 2.用来鉴定 DNA 的技术是 ： （ B ） A No
33、rthern 印迹 B Southern 印迹 C Western 印迹 D亲和层析 E离子交换层析 3.下列那项不是重组 DNA 技术中常用的工具酶： （ D ） A限制性核酸内切酶 B DNA 连接酶 C DNA 聚合酶 D RNA 聚合酶 E反转录酶 4.关于限制性核酸内切酶的叙述，下列哪项是错误的？ （ E ） A限制性核酸内切酶分为三类，用于基因工程的为 酶 B限制性核酸内切酶切割后可产生粘性末端或平端 C识别的核苷酸序列个数可以是 6 个或 8 个 D. 识别的序列一般具有回文结构 E识别的 DN A 为 单链 5.关于基因工程的叙述，下列哪项是错误的？ （ B ） A基因工程也称
34、基因克隆 B只有质粒 DNA 可作为载体 9 C重组体 DNA 转化或转染宿主细胞 D需获得目的基因 E需对重组 DN A 进行纯化、筛选 6.有关质粒的叙述，下列哪项是错误的？ （ E ） A小型环状双链 DNA 分子 B可小到 2 3Kb 大到数百个 Kb C能在宿主细胞中独立自主地进行复制 D常含有耐药基因 E只有一种限制性核酸内切酶切口 7下列哪项不是重组 DN A 的连接方式？ （ C ） A粘性末端与粘性末端的连接 B平端与平端的连接 C. 粘性末端与平端的连接 D人工接头连接 E同聚物加尾连接 8 DNA 克隆不包括下列哪项步骤？ （ E ） A选择一个适合的载体 B限制性核酸内
35、切酶在特异位点裂解质粒和目的基因 C用连接酶连接载体 DNA 和目的 DNA，形成重组体 D用载体的相应抗生素抗性筛选含重组体的细菌 E重组体用融合法导入细胞 9 基因重组是指 DNA 分子的： （ A ） A共价连接 B氢键连接 C离子键连接 D交换 E退火 10在分子生物学中，重组 DNA 又称为： （ D ） A.酶工程 B.蛋白质工程 C.细胞工程 D.基因工程 E.DNA 工程 11基因工程中，不常用到的酶是 （ E ） A限制性核酸内切酶 B DNA 聚合酶 C DNA 连接酶 D逆转录酶 E DNA 解酶 12能识别 DNA 的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链 DNA 的一
36、类酶称为： （ B ） A. DNA 内切酶 B限制性内切核酸酶 C非限制性内切核酸酶 D限制性外切核酸酶 E非限制性外切核酸酶 13 cDNA 是指： （ A ） A在体外经反转录合成的与 RNA 互补的 DNA B在体外经反转录合成的与 DNA 互补的 DNA C在体外经反转录合成的与 RNA 互补的 RNA D在体内经反转录合成的与 RNA 互补的 RNA E在体内经反转录合成的与 RNA 互补的 DNA 14质粒的分子结构是： （ A ） A环状双链 DNA B环状单链 DNA C环状单链 RNA D线状双链 DNA E线状单链 DNA 15聚合酶链式反应常常缩写为： （ E ） A
37、PRC B PER C PDR D BCR E PCR 16用于 PCR 反应的酶是： （ E ） A DNA 连接酶 B碱性磷酸酶 C逆转录酶 D限制性内切核酸 E Taq DNA 聚合酶 17基因工程中使目的基因与载体拼接的酶是： （ C ） A DNA 聚合酶 B RNA 聚合酶 C DNA 连接酶 D RNA 连接酶 E限制性核酸内切酶 18 互补筛选属于： （ C ） A抗药性标志筛选 B酶联免疫筛选 C标志补救筛选 D原位杂交筛选 E免疫化学筛选 19确切地讲， cDNA 文库包含： （ E ） 10 A一个物种的全部基因信息 B一个物种的全部 RNA 信息 C一个生物体组织或细胞
38、的全部基因信息 D一个生物体组织或细胞的全部 RNA 信息 E一个生物体组织或细胞所表达 mRNA 信息 20下 烈 描述最能确切表达质粒 DNA 作为克隆载体特性的是： （ D ） A小型环状双链 DNA 分子 B携带有某些耐药基因 C在细胞分裂时恒定地传递给子代细胞 D具有自我复制能力 E获得目的基因 21.基因工程中常用限制性内切酶 的识别序 列，正确的说法是： （ E ） A.聚胞苷酸 B.聚腺苷酸 C.6 或 8 个任意核苷酸 D.4 或 6 个任意核苷酸 E 具有回文结构 22基因工程的基本过程不包含： （ E ） A.DNA 重组体的形成及转化 B.限制酶的切割 C.载体及目的基
39、因的分离 D.重组体的筛选与鉴定 E.重组体的序列分析 23.有关理想质粒载体的特征，正确的是： （ B ） A.其复制受宿主控制 B.含有多种限制性内切酶的单一切点 C含有同一限制酶的多个切点 D为线性单链 DNA E不含耐药基因 24.下列那个物质一般不用作 基因工程的载体： （ C ） A噬菌体 B质粒 C大肠杆菌基因组 D反转录病毒 DNA E人工酵母染色体 25.基因工程的操作程序可简单的概括为： （ E ） A将重组体导入宿主细胞并筛选 B限制酶的应用 C将载体和目的基因接合成重组体 D目的基因和载体的分离提纯与鉴定 E分、切、接、转、筛 26.基因表达的多级调控不包括： （ A ） A DNA 复制 B转录起始 C转录后加工 D. 翻译起始 E. 翻译后加工 27.下列基因工程中的目的基因的来源，最不常用的是： （ C ） A. 人工合成 DNA B从 mRNA 合成 cDNA C. 从真核生物染色体 DNA 中直接分离 D从基因文库中获取 E从细菌基因组 DNA 中直接分离
