1、目的基因验证,酶切验证方向,Sense,Anti-sense,Promoter,Promoter,Coding sequence,Coding sequence,NOS,NOS,双酶切,单酶切,酶切位点的选择,1、载体上有，目的片段内部也有，但最好都分别只有一个位点；2、目的片段上的酶切位点不要位于片段中央附近，要选取能够区分大小的位点；,1、用连接的两种酶验证；2、参照单酶切。,酶切验证方向的方法很灵活多变，具体情况具体分析。,pCxsn-PtWRKY60的方向验证,ATGGATGTCTTTCCCTCTTGCAAAGAAAAGGTGGAAGCTCTTCAATTCGAGTTGGAACACAGG
2、CAGAAAGAGAATGAAAGTCTTAGATTTATGCTTGGAGTTATGACCAGAAGATTCAGCATTCTTCAAGCCGAGATTCAAGAAACCGAAGAACATCAACAAAAGACAGCTAGCAACTTAGCGGATGGAGATCAAGCTTGTCATGAAATCCTTGACTCGAACAAGAGAGCAAGATTTGAAGTTCCCATAACCAAGGCATCGAGAATCTTGGTGAGAAGTCACTCCAATGACAAGAGCCTGATTGTGAAAGATGGATATCAATGGAGAAAGTATGGCCAGAAGGTTACTAAGGATAACCCATCA
3、CCTCGAGCTTACTTCAGGTGTTCCATGGCTCCTAATTGCCCCGTCAAGAAGAAGGTCCAAAGATGTGTAGAAGATGATTCAGTACTTGTTGCAAGCTATGATGGAGAACACAACCATGAACCCAATGGTTCACATGGACAATATTTATGTTCTCCACATACCTCATCATCAAAAATTTCCATAACTAATCATGTCCTCAAGTGTCCAATCGAAATTCCTCCTCTTCAACCATCTATAGCTCTTGATCTTACTCTTTCAAGTCCCAGTAATCAACAGAAGGAAAATCCTTCTAAAAGATCC
4、ATGGAAGACTGCGGCAAGATTAATAATAACTGCAACAAGAACTACATTGAAGAATATGTGGCATCTTTAACTAAAGATCCTACCTTCTCTGTAGCTTTAGCTGCGGCTGTTGCAAGTTCAATGAGTGACCTGTCTTCGTCAAGAATGCTGTGA,PtWRKY60 CDS序列,pCxsn载体,NEBcutter分析片段上的酶切位点,10ul体系酶切pCxsn-PtWRKY60,Plasmid: 8.75ul; M buffer: 1ul; HindIII: 0.25ul.37水浴2-3h,1541bp,1117bp,AS,S,测序,测序的样本可以为：菌液、质粒、PCR产物、其他；,测序要提供测序引物；,一次反应大约可测800bp的长度，如果目的片段超过这一长度可以选择测通、双向，或者是单向walking等方法。,测序单,测序结果,波峰信号,序列信息,序列信息,测序结果和原序列比对结果,Identity=98.22%,波峰信号,谢 谢！,
