1、 1 猪 圆环病毒抗原（ PCV Ag） 酶联免疫 分析 （ ELISA） 试剂 盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 使用目的： 本试剂盒用于测定 猪 血清、血浆及相关液体样本 中 圆环病毒抗原（ PCV Ag） 的 含量。 实验原理 本试剂盒应用 间接 法测定 标本 中 猪 圆环病毒抗原（ PCV Ag） 水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 已知浓度的 圆环病毒抗原（ PCV Ag）标准品和未知浓度的 圆环病毒抗原（ PCV Ag） 待 检样品 ， 温育后，加入生物素 标记 的 抗 IgG抗体 ， 再与 链霉亲和素 -HRP 结合，形成 免疫 复合物 ，
2、经过 彻底洗涤后 加 底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 圆环病毒抗原（ PCV Ag） 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），通过标准曲线 计算样品 中 猪 圆环病毒抗原（ PCV Ag） 浓度。 试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液 20ml 1 瓶 8 标准品 S1（ 360 ng/L） 0.5ml 1瓶 2 链霉亲和素 -HRP 6ml 1 瓶 标准品 S2（ 180 ng/L） 0.5ml 1瓶 3 酶标包被板 12 孔 8 条 标准品 S3（ 90 ng/L） 0.5ml 1瓶
3、 4 生物素标记的抗 -IgG 抗体 6ml 1 瓶 标准品 S4（ 45 ng/L） 0.5ml 1瓶 5 显色剂 A 液 6ml 1 瓶 标准品 S5（ 22.5 ng/L） 0.5ml 1瓶 6 显色剂 B 液 6ml 1/瓶 9 说明书 1 份 7 终止液 6ml 1 瓶 10 封板膜 2 张 标本要求 1 不能检测含 NaN3 的样品 ，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP）活性。 2 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将 标本放于 -20保存，但 应避免反复冻融 操作步骤 1. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需
4、的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。 2. 加样： 分别设空白孔（空白对照孔不加样品，其余各步操作相同）、标准品孔、 待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品 50l，在样本反应孔中 加入 50 微升样本 ， 盖上 封板膜 ，轻轻振荡混匀， 37温育 45 分钟。 3. 配液： 将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体， 甩干 ，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 4 次，拍干。 5. 加 生物素标记的 抗 -IgG 抗体 ：每孔加入 生物素标记的 抗 -IgG 抗体 50l。 3
5、7温育 30 分钟 6. 洗涤：操作同 4。 7. 加 链霉亲和素 -HRP：每孔加入 50l 的链酶亲和素 -HRP，轻轻振荡混匀， 37温育 302 分钟。 8. 洗涤：操作同 4。 9. 显色：每孔先加入显色剂 A 50l，再加入显色剂 B 50l，轻轻震荡混匀， 37避光显色15 分钟 . 10. 终止：每孔加终止 液 50l，终止反应 （此时蓝色立转黄色） 。 11. 测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的 吸光 度（ OD 值） 。 测定应 在加终止液后 15 分钟以内进行 。 计 算 以标准物的浓度为横坐标， OD 值为纵坐标，在 坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的O
6、D 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以 稀释倍数 ；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值 待 入方程式，计算出样品浓度，再乘以 稀释倍数 ，即为样品的实际浓度。 注意事项 1 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2 浓洗涤液 可能 会有 结晶 析出，稀释时可在水 浴中加温助溶 ，洗涤时不影响结果。 3 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准 确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4 如标本中待测物质含量过高 （样本 OD 值大于标准品孔 第一孔的 OD 值 ） ，请先 将样本稀释一定倍数（ n 倍） 后再测定，计算时请最后 乘以 稀释倍数 （ 5 n） 。 5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6 本试剂不同批号组分不得混用。 显色剂 B 请避光保存。 7 严格按照说明书的操作进行， 试验结果判定必须以酶标仪读数为准 . 8所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 线 性 范围： 10ng/L -360ng/L 规格： 96 猪 份 /盒 保存条件及有效期 1 试剂盒保存： ； 2-8 。 2有效期： 6 个月
