1、传染病疫情现场采样技术,主要内容,传染病疫情病原学简介,手足口病疫情：EV71，COXA16等肠道病毒流感样疫情：流感病毒、腺病毒、肺炎支原体、呼吸道合胞病毒等胃肠炎疫情：诺如病毒、轮状病毒、霍乱弧菌、志贺菌、沙门氏菌、 致泻性大肠杆菌等H7N9流感疫情：H7N9流感病毒伤寒、副伤寒：伤寒、副伤寒沙门氏菌,样品正确采集、保存、运输的意义,样品的正确采集、保存与运输，是获得正确检测结果，采取针对性有效手段控制相应传染病的必要前提。检测结果与样品质量密切相关。,影响样品质量的因素,采样时间样品采集类别选择合适的保存液保存条件（常温、低温、适温、冷冻）送检是否及时,病毒采样管,细菌采样管,标本采集人
2、员,病毒的诊断取决于高质量标本的采集，及其保存运输等环节。医疗机构的医生、护士或疾病预防控制中心专业人员负责标本采集并填写标本登记表，标本采集人员按照相关要求做好个人防护。,标本采集登记表,个人防护设备（PPE）,采集前的准备,口罩 (N-95 or N/P/R-100)手套帽子鞋套防护服防护目镜,采集物品包,采集前的准备,常用的采样液/病毒运输液(VTM）,采集前的准备,pH 7.47.6的Hanks液MEM/DMEM液在采样液中需加入抗菌素，可用青霉素（终浓度为100U/ml）、庆大霉素（终浓度为1mg/ml）和抗真菌药物（终浓度为2g/ml）。在无菌的带螺旋塑料管分装2-3ml采样液。最
3、好储存在:20,4可放4896h,室温12天。,采样拭子：使用头部为聚酯纤维的病毒采样拭子（鼻及口咽型），铝或塑料做柄，不用木柄棉拭子。,上呼吸道标本：咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液下呼吸道标本：气管吸取物、肺洗液、肺组织标本血清标本：急性期血清和间隔2-4周的恢复期血清全血标本：急性期非抗凝血消化道标本：粪便、肛拭子、呕吐物脑脊液标本虫媒标本：蚊子、蜱虫等动物标本：血清、组织等、环境标本：粪便等排泄物、环境表面涂抹物、污水等,标本种类,应当尽量采集病例发病早期的呼吸道或粪便标本症状出现后尽早采集 尽量在抗病毒药物使用前采集血清标本应采集发病早期和恢复期双份血清环境标本采集要注意溯
4、源性,标本采集注意点,咽拭子,标本采集,用2根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入含3ml采样液的管中，尾部弃去，旋紧管盖。,标本采集,2、肛拭子棉拭子应插入肛门直肠内（约2-5cm），采样后应该在棉拭子上看见粪便,采样后肛拭子应埋入C-B培养基或HANKS保存液中。,标本采集,3、血清采集5ml静脉血加入消毒试管中，离心分离血清，放入带螺旋盖管内， 于-20以下保存。,标本采集,4、物体表面涂抹物用棉拭子先蘸入采样液，然后在物体表面来回擦拭3-5次，将拭子头浸入含3ml采样液的管中，尾部弃去，旋紧管盖。,尽快运到实验室24小时内可以检测的可以保存在4，超过24小
5、时-70冻存。避免反复冻融血清标本暂时存在可在4冰箱，长期保存于-20冰箱。,标本保存,流感样疫情标本采集要点,样品种类：咽拭子、鼻拭子、含漱液采集时间：发病3天内（体温38 ）保存条件：24小时内存于4以下环境 ，超过24小时存于-70 以下环境（避免反复冻融）。病毒采样管：HANKS液（23ml/管）及时送检要求：疫情样本建议当天送检，监测标本根据送检时间选择合适的保存条件。标本的包装必需低温转运且保证标本四周带冰。,胃肠炎疫情标本采集要点,样品种类：肛拭子、粪便（510ml或g，拇指大小）、呕吐物等采集时间：症状出现14日内粪便或肛拭子；保存条件： 24小时内存于4以下环境，超过24小时
6、存于-70 以下环境。病毒采样管：HANKS液（23ml/管）及时送检要求：同流感检测样品要求,手足口病标本采集要点,样品：咽拭子、肛拭子、粪便、疱疹液采集时间：发病7日内粪便（510ml或g，拇指大小，不用加保存液）或肛拭子；发病3日内咽拭子（或深咳痰）。疱疹液（75%酒精消毒）保存条件： 24小时内存于4以下环境。 超过24小时存于-70 以下环境。病毒采样管：HANKS液（23ml/管）及时送检要求：重症或暴发疫情样本24小时内送到实验室。,禽流感外环境标本采集要点,样品种类：禽类笼具擦拭标本、宰杀案板擦拭标本、禽类粪便、清洗禽类的污水等保存条件： 24小时内存于4以下环境，超过24小时
7、存于-70 以下环境。病毒采样管：HANKS液（23ml/管）,伤寒副伤寒病例标本采集要点,样品：肛拭子、粪便、血液采集时间：发病23周粪便（510ml或g，拇指大小，不用加保存液）或肛拭子；发病12周血液（10ml）保存条件：血液注入血培养瓶及时送实验室培养；肛拭子埋入C-B培养基中， 4保存不超过3天。及时送检要求：重症或暴发疫情样本及时送到实验室。,标本包装和运输,标本必须放在密封的带螺旋盖的、耐低温的塑料管内，直接在塑料管上用油性记号笔写明编号、种类、姓名及采样日期，再放入塑料密封袋内，每袋装一份标本同时将标本有关信息填入标本送检单送检单应信息完整，放入另一塑料袋内，不能与标本放置一起,专用标本运送箱,检测,PCR快速检测1、RT-PCR2、QRT-PCR血清学检测1、IgM2、IgG3、HI4、中和抗体5、免疫荧光检测核酸序列测定 1代和2代测序病毒培养鉴定1、镜检2、血清鉴定3、分子鉴定,谢 谢 观 赏,
