低温乙醇法从人血清中提取免疫球蛋白.docx

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资源描述

低温乙醇法从人血清中提取免疫球蛋白一、实验目的利用低温乙醇法从人血清中分离出免疫球蛋白(Ig),并获得副产物血清白蛋白。二、实验原理(1)低温乙醇法Cohn6法:美国哈佛大学EJCOHN教授研究组,在短短两年建立了低温乙醇分段提取法。方法原理:往蛋白水溶液中加入中溶性有机溶剂,如乙醇、丙酮等,主要是降低水分子的活度,降低溶液的介电常数,从蛋白分子周围排斥水分子,使蛋白分子之间通过极性基团的相互作用,在范德华力作用下,发生凝聚。不过由于有机溶剂存在,降低了蛋白分子表面憎水基团的作用,因而引起蛋白分子聚集的主要极性基团的相互电荷之间的引力。(文献20)分离过程中,二法通过五个因素的变动(五变系统),使很多血浆蛋白质得以分离。这五个因素及其各自的作用是;乙醇:使蛋白质分子“脱水”;pH值;蛋白质在等电点时易于沉淀;电解质浓度:在低离子浓度下,对蛋白质溶解度有较大影响;蛋白质浓度:浓度越低,其沉淀作用越小;温度:在低温下,可避免乙醇对蛋白质的变性作用。同时,蛋白质溶解为吸热反应,溶解度随温度上升而增高。经实验得知,利用低温乙醇法能将血清蛋白分成六个组分

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