精选优质文档-倾情为你奉上引物设计原则（汇总）普通引物设计（适用于从载体上扩增模板）：1.普通引物长度一般在20-30bp之间，常用24-28bp左右以保证基因特异性；2.下载基因序列到VectorNTI；3.找到所需安装载体序列；4.将基因序列的CDS高亮标记；5.寻找载体序列中常用酶切位点，一般为EcoRI、BamHI、HindIII、XhoI等等，比对检测基因序列中是否有这些位点，有的话舍弃，最后选择两个酶切位点，最好离得远一点，并且最好buffer用一样的。酶切位点一般是6bp的回文序列；6.从基因ATG开始往后选择10-20bp均可（我的习惯是27bp-6bp酶切位点-2bp保护碱基-xbp补齐序列），但最好保证最后两个是G或者C，以减少错配率；7.将上游酶切位点序列补在ATG前方，并根据载体对框情况补足两者之间的空缺，再根据序列的GC含量和TM值在酶切位点前补足保护碱基，以保证GC和AT的含量不能过高。注意，所有的补齐不能用到终止密码子；8.检测上游序列的结构情况，理论上不要太多二级结构以及3端
