精选优质文档-倾情为你奉上肺动脉平滑肌细胞传代培养步骤一.试剂及材料：PBS液、0.25%胰酶、10%FBS、原代培养的肺动脉平滑肌细胞二.仪器：离心机、显微镜、1000ul移液器、1000ul枪头、培养皿三.操作步骤：1.吸弃原培养皿中的培养基，加入PBS液2ml（60mm培养皿），用枪头反复冲洗，弃液。重复3次；2.每个培养皿加入0.25%的胰酶500ul，轻轻上下摇动培养皿，使胰酶与细胞充分接触（消化约2分钟）；3.打开10%FBS培养基管盖，将培养皿置于显微镜下，随时观察细胞消化情况；4.当大部分细胞变成圆形后，迅速加入1ml10%FBS（注意混匀）终止消化。并有剪过尖的枪头吹打培养皿的斑块区域（尽量减少吹打次数，以减少细胞损伤，皿底不必太干净）；5.将培养皿中的细胞悬液（包括气泡）移入15ml离心管，1000rpm离心2分钟，吸弃上清（注意不要吸到细胞）；6.离心管中加入3ml10%FBS，轻轻吹打混匀后平均分入6个35mm培养皿中（0.5ml/皿）。每个培养皿中补加1ml 10%FBS；7.置于培养箱中培养即可。
