第五章 重组DNA的获得及目的基因导入受体细胞严格执行突发事件上报制度、校外活动报批制度等相关规章制度。做到及时发现、制止、汇报并处理各类违纪行为或突发事件。一、粘性末端的连接DNA连接酶把相互靠近的 5端磷酸与3-OH连到一起单酶切、双酶切第一节 DNA的体外重组DNA的体外重组:将目的基因与载体连接,这种重新组合的DNA称为重组DNA。严格执行突发事件上报制度、校外活动报批制度等相关规章制度。做到及时发现、制止、汇报并处理各类违纪行为或突发事件。(一) 直接连接T4 DNA连接酶虽然能连接平末端,但效率很低,只有粘性末端的110%。5 5 5 5 3 3 3 3 -OH-OH-P-PP- P-HO- HO-5 3 -OH-PP-HO-5 3 二、平末端(blunt end)的连接严格执行突发事件上报制度、校外活动报批制度等相关规章制度。做到及时发现、制止、汇报并处理各类违纪行为或突发事件。(1)同聚加尾法 (二) 人工加尾形成 “粘性末端” DNA末端转移酶能在没有模板的情况下给DNA的3-OH端加上脱氧核苷酸。 原理:分别给载体和插入片断加上互补的核苷酸。 加尾碱基互补严格执行突