primer5和Oligo的引物设计、使用方法吴乃虎的基因工程原理一、引物设计stepbystep1、在NCBI上搜索到目的基因，找到该基因的mRNA,在CDS选项中，找到编码区所在位置，在下面的origin中，Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。2、用PrimerPremier5搜索引物 打开PrimerPremier5,点击File-New-DNAsequence,出现输入序列窗口，Copy目的序列在输入框内(选择As)，此窗口内，序列也可以直接翻译成蛋白。点击Primer,进入引物窗口。 此窗口可以链接到引物搜索”、“引物编辑”以及搜索结果”选项，点击Search按钮，进入引物搜索框，选择“PCRprimers”，“Pairs”，设定搜索区域和引物长度和产物长度。在SearchParameters里面，可以设定相应参数。一般若无特殊需要，参数选择默认即可，但产物长度可以适当变化，因为100200bp的产物电泳跑得较散，所以可以选择300500bp. 点击OK,软件即开始自动搜索引物，搜索完成后，会自动跳出结果窗口，搜索结
