测序常见问题及其分析CollectedbyRobertoRun,12.10.2008(From:HTUTUUUTTH)1、PCR产物测序时出现重叠峰问题图1（模板中有碱基缺失，往往是单一位点（1-1）或两个位点（1-2）碱基缺失导致测序结果移码）图1-1图1-2解决方法：将PCR产物克隆到质粒（如T载体）中挑单克隆测序，或将PCR产物进行PAGE纯化（至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化）后再进行测序。问题图2（PCR产物不纯，含部分序列一致的两种以上的片段，长度不一）flfTTC：TCTCCPTi0-FeTrTTEftePiHeTC：TCTMTIfacTTTTTTa-TasbbiQQE网图2解决方法：主要原因是PCR产物没有纯化，含有部分序列一致的两种以上长度不一的片段，将PCR产物进行PAGE纯化（至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化）后再进行测序，便可解决。问题图3（测序引物有碱基缺失）测序引物有碱基缺失（一般是引物的5端缺失），和模板的碱基缺失即图1有些类似，所不同的是模板碱基缺失
