1、中英HUST-RRes基因工程和基因组学联合实验室基因工程原理何光源2016-04-05中英联合实验室第九章 大肠杆菌基因工程第一节 大肠杆菌表达体系第二节 大肠杆菌的表达载体第三节 克隆的真核基因在大肠杆菌细胞中的表达19126中英联合实验室第一节 大肠杆菌表达体系19126中英联合实验室第一节 大肠杆菌表达体系大肠杆菌表达体系克隆基因正确表达的基本条件19126中英联合实验室大肠杆菌表达体系基因工程的重要目标之一是，制备按其它方法难以生产的大量纯化的蛋白质产物，为此就需要有一种能够高水平表达异源蛋白质或重组蛋白质的表达系统。而良好的表达系统的选择要考虑多方面的因素，如寄主细胞的生长特性、蛋
2、白质产物转译后的修饰与生物活性，以及异源蛋白质的表达水平和分泌方式等。目前被选作表达异源蛋白质的表达系统有细菌（包括大肠杆菌和枯草芽 杆菌 、 、 、 物和 物细胞等。19126中英联合实验室大肠杆菌表达体系而 ，大肠杆菌表达系统 有 的 性 大肠杆菌的 ，特 是基因表达 的分 理有 的 一种的基因工程实验体系，有currency1的寄主菌和“的载体多克隆的真核基因fifl以在大肠杆菌细胞中实 有、高水平的表达方、 作、本”， 工化 量生产。19126中英联合实验室大肠杆菌表达体系大肠杆菌中表达体系表达真核基因的“ 真核基因在原核基因之在大的 ，在大肠杆菌细胞中“fl能 有为真核 工需要的体系
3、，真核基因难 在大肠杆菌细胞中实 能性表达真核基因的转 原核“。细菌的 合 “能真核 源基因fl能 有 有大肠杆菌转 能的核 。真核基因 的分 细菌有 异， 真核基因 性和细菌核 体合的能，而 正的转 和 译19126中英联合实验室大肠杆菌表达体系多真核基因的蛋白质产物，fi要 转译后的工修饰（正确 和组 ，而大多 的修饰作currency1在细菌细胞中“在细菌的蛋白 ，能够 的真核基因表达的蛋白质分 ， 其 。19126中英联合实验室大肠杆菌表达体系为 克 ， 发展出 多种“的方法 克隆的真核基因插入到原核 的下游附近部位，如大肠杆菌Lac 纵 的lac ，Trp 纵 的trp 及tac ，噬菌体的PL和P 以及pB322载体的-内酰胺 真核细胞中分离完工的 ，使currency1反转 合出cD ，连 到当的载体，fl以克真核基因的隔 根据蛋白质的氨基 ，应currency1化学方法合出“带隔的寡 脱氧核 核 的短片段通 引突变的的方法消除细菌中在的能 源真核蛋白质的蛋白 分 。19126中英联合实验室克隆基因正确表达的基本条件最基本条件 能 正 的转 和 译，在正 情况下还与译后工及新生多肽在细胞中的分布有关。重要条件编码的蛋白质产物应能维持正 的 性 有核 体合位点 有克隆基因的 能（强 插入 的正确取向19126
