1、实 验 一细菌的简单染色和革兰氏染色辽宁师范大学生物基础实验教学中心谢鲲鹏（一）实验目的：1、学习微生物涂片的基本技术2、巩固显微镜的使用方法和无菌操作技术3、掌握细菌的简单染色法和革兰氏染色法。（二）实验原理：1、简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的方法。此法操作简便，适用菌体一般形态和细菌排列的观察。2、革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram氏创立的。而后一些学者在此基础上作了某些改进。革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。（三）实验器材1、菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌。2、染色剂：吕氏美蓝、结晶紫、碘液、95%酒精、番 。3、 器 用 ：显微镜、酒精 、片、 种 、
2、 、 镜 、 液 、 。（ ）实验方法：1、简单染色：（1）涂片： 片， 一 生理 片中 ，用 种 无菌操作别大肠杆菌和金黄色葡萄球菌上 currency1菌 中，“涂fifl。 （2） ： 。（3）固：涂上，”23。（4）染色： 片 片上， 染液 涂片上。（5） ：染液，用 ， 涂片上的 无色 。（） ： ， 用 ， 用 。（ ）镜 ：涂片 后镜 。2、革兰氏染色：（1） 片： 菌种 物 涂片， ，固。（2） 染： 结晶紫染色1m ， 。（3） 染：用碘液 ，用碘液 1m ，。（4）色：用 片上的 ， 片 ，在 色 ，用 95%的色， 的无紫色 ，立 。（5） 染：用番 染 2m ， 。（）
3、镜 ： 后用 镜观察。 （ ）“涂片染色（ ）实验 结1、实验结 简单染色 革兰氏染色2、 习（1）简单染色操作 涂片 固 吕氏美蓝染色12 镜 （2）革兰氏染色操作 片 染（结晶紫）1m 染（碘液）1m 色（95% 无色）23 染（番 ）2m 镜3、 （1）涂片 宜厚，免色 完全，造假阳性。（2）色 间，如色度，革兰氏阳性菌 被色而染阴性菌；如色 间短，革兰氏阴性菌会被染革兰氏阳性菌。（3）菌龄，应选择活跃生长期的幼 物作革兰氏染色。 间长， 死亡及部溶，改变了细菌CW的透性，造阳性菌的假阴性反应。（4）”固 宜热。（5） 染剂的作用，是增染料和细胞之间的亲和性附力， 某种方式帮助染料固在细胞上，使之 易落。4、思考题（1）你认 备细菌染色标本 ，尤 应该 那些 节？（2）如 你的涂片未经热固， 会 现什么问题？如 热度高， 间太长，又会怎么样呢？（3）你认 那些 节会影响革兰氏染色结 的正确性？ 中最关键的 节是什么？（4）革兰氏染色 ， 染前能碘液吗？色后 染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应别是什么颜色？
