1、实验七 小鼠骨髓细胞染色体标本的观察杭州师范大学 刘姬艳一、实验目的1.通过小白鼠骨髓细胞染色体的制备，初步掌握低渗法制备动物骨髓细胞染色体的方法2.熟悉染色体的形态、种类及小白鼠等动物染色体的数目及特点二、实验原理骨髓细胞是具有旺盛分裂能力的细胞，从这些分裂细胞中，可观察到处于分裂中期的染色体，能对一种动物染色体的形态特征、数目进行准确的观察和分析。由于小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞，具有高度的分裂能力，本实验采用这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。首先,为了获得较多的中期分
2、裂相骨髓细胞,必须给动物注射一定剂量的秋水仙素。秋水仙素对分裂期纺 的形成具有 用， 动物 注射 量的秋水仙素 ,处于分裂 中的骨髓细胞由于纺 能形成,中期染色体能 , 量的细胞处于观察染色体形态 的分裂中期。 ,为了能 的观察染色体的形态，的骨髓细胞 过低渗 处理细胞currency1、染色体 的分“。固定 fifl 染色体的形态。染色 ”染色体分、观察。 二、实验原理 (continued)1.材料小白鼠2. 剂.1 秋水仙素,.,固定 fifl 1, ”染,.1 .，2 。 . 材 、 、 、 、小 、注射 及 、 度 、 、 片和 片、染色、 片 三、实验用品四、实验步骤1. 预处理：
3、实验前2.小 ， 体 注射.2，给小白鼠 注射秋水仙素。2. 断颈处死动物.3. 剥取 骨和 骨， 组， 的 骨4. 冲洗骨髓 2 ,注射 骨一, 骨髓, 至 中.1r n,弃上 .5. 低渗加 L . ,7o低渗2分钟，中间（约1分钟）用 吹打二 ，细胞分“，悬浮于中。 6. 离心：1r 分钟 弃 上 ，7. 固定 I ：加6ml固定液 用吸管 吹 ，并 轻轻 匀 室温下静置2分钟， 1分钟 吹打一 。8. 离心：1r 分钟，弃上 。 9. 固定 II ：同固定I。10. 离心：同 ,加1L固定， 吹打成细胞悬。11. 滴片：用 细胞悬，滴在预冷的 片上，室温晾干12. 染色1 ”染染色分钟四、实验步骤 (continued)在 下观察 ”染色之 的染色体片 染色体呈紫红色，找 分“ 度的中期染色体图象, 观察小白鼠的染色体形态，统计 染色体数目。制得的标本应是细胞多、颜色为紫红色。此 间期细胞由于低渗和固定处理，细胞膜和质已 掉， 下看到的仅为currency1 呈圆形的细胞核。分裂期细胞染色体集中在一起， 外也无细胞膜包裹，染色体之间无 叠，分，臂的长度 中。但 的是分裂相 多。 五、实验结果2012年11月（生技101班）2012年11月（生技101班）
