1、实验十一 病毒的血清学实验操作:血凝实验血凝抑制实验实验目的血凝试验:滴定病毒的血凝效价,采用一定的病毒量,通常采用4个血凝单位。血凝抑制试验:应用标准病毒液测定血清中的相应抗体或应用特异性抗体鉴定新分离的血凝性病毒。 0.2弃掉孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10生理盐水(ml)尿囊液(ml)0.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2病毒稀释度1 10 1 20 1 40 1 80 1 160 1 320 1 640 1 1280 1 2560 对照补充液(ml) 各0.2ml鸡红血球细胞悬液
2、(ml)各0.4ml血凝试验(血凝效价的滴定)将有机玻璃板孔从110进行编号,从第1孔起至第10孔,每孔加生理盐水0.2ml。将尿囊液按下表进行稀释。自第10孔开始反方向向前每孔补充0.2ml生理盐水。(WHY?)自第10孔开始反方向向前每孔加入0.5%鸡红血球0.4ml,摇匀后放置室温45分钟 0.2弃掉孔号 1 2 3 4 5 6 7 血清对照 病毒对照 红细胞对照生理盐水(ml)抗血清(ml)0.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2 0.4抗血清稀释度1 10 1 20 1 40 1 80 1 160 1 32
3、0 1 6404个单位病毒液(ml)各0.2ml 0.2ml鸡红血球细胞悬液(ml)各0.4ml血凝抑制试验从第1孔起至第9孔,每孔加生理盐水0.2ml,第10孔加0.4ml。抗血清按下表进行稀释,第8孔为血清对照。于第1孔至第7孔中各加入0.2ml 4个血凝单位的病毒液,第9孔亦加入0.2ml病毒液作病毒对照。稍加震摇后,每孔加入0.5%鸡红细胞0.4ml,室温静置45分钟。血凝试验原理血凝素(hemagglutinin HA):由病毒基因编码的糖蛋白刺突。 病毒 入 细胞有。HA 或 红细胞表 N体 起红细胞凝 。血凝试验 定效价 定:凝 特 :凝 currency1:凝 清“:稍凝 :血凝效价:fi凝 fl的 稀释度。fl的稀释度为1个血凝单位。血凝抑制试验原理病毒 起的血凝 相应的抗血凝素抗体 抑制,血凝抑制。用血凝素特异性抗体 病毒表 相应的HA相作用,病毒血凝抑制的试验血凝抑制试验。血凝原理 血凝抑制原理血凝抑制试验 定测定孔 RBC”于孔中,fi 。(+)凝 ( )血清对照孔:RBC”于孔,自凝病毒对照孔:凝 RBC对照孔:自凝血凝抑制试验效价:fi血凝抑制的 血清稀释度。