免疫共沉淀(GE Immunoprecipitation Starter Pack).docx

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资源描述

免疫共沉淀(GEImmunoprecipitationStarterPack)(一) 基本原理研究细胞内蛋白质与蛋白质相互作用的一种技术,其基本原理是,当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质蛋白质间的相互作用被保存了下来,这时在细胞裂解液中加入抗兴趣蛋白的抗体,孵育后再加入与抗体FC片段特异性结合的结合于Agarose珠上的金黄色葡萄球菌蛋白A/G(其亲和力对pH值非常敏感,随pH值的降低而急剧降低),若细胞中有正与兴趣蛋白结合的目的蛋白,就可以形成这样一种复合物:“目的蛋白一兴趣蛋白一抗兴趣蛋白抗体一ProteinA/GPLUS-Agarose”,经沸水浴,复合物中的四组分又被分开。然后经Westernblotting检测目的蛋白是否为预测蛋白。这种方法的优点是:(1)相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;(2)蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;(3)可以分离得到天然状态的相互作用的蛋白复合物。缺点为:(1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质蛋白质相互作用;(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在

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