实时定量PCR技术 目录实时定量PCR基本原理实时定量PCR的实验设计和数据处理实时定量PCR两种相对定量方法比较实时定量PCR实验实例分析实时定量PCR常见故障排查实时定量PCR的新应用实时定量PCR基本原理常规vs实时 常规PCR:借助电泳对扩增反应的终产物进行半定量及定性分析 定量PCR技术:利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,最终精确的对起始模板的定量分析常规vs实时 优缺点比较 定量PCR 常规PCR灵敏度高高精确度安全省时只能进行半定量或定性分析不安全易污染费时费力定量PCR三个基本概念 扩增曲线指数增长期 平台期线性增长期背景期阈值与C(t)值 阈值:是循环开始315个循环的荧光信号的标准偏差的10倍,设定在扩增曲线指数增长期 C(t)值:荧光信号(扩增产物)到达阈值时所经过的扩增循环次数Threshold line C(t) value C(t) value18.12 +/- 0.04Threshold line C(t) value C(t) value18.12 +/- 0.04C(t) value18.12 +/- 0.04C(