1、 1实验目的粪便标本中常含有很多杂菌，应根据检验目的菌的不同而选择培养基，以利于病原菌的检出。而且，因其各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辨是否为病原菌。常见的病原菌有志贺氏菌属、致病性大肠杆菌属、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌等。这次实验中我们从粪便标本中检出的是大肠埃希菌、痢疾志贺菌。而且，我们从这次的综合性实验中了解到了医学微生物学主要的研究方法和手段，掌握了微生物试验的基本技能和基本原理，树立了牢固的无菌观念。同时培养了我们的动手能力和表达能力。2粪便标本直 粪便检 染色染色动力观 动试验培养菌培养 直 分 性 性 分菌 形态生 应菌 菌 形态生 应SS 性弧菌选
2、择性 菌 形态生 应 培养微 培养 培养实验 31.实验 种、 种currency1、性“、试fifl、 、 、 ”培养、 CX21 生物微、1500W、 、 、1 而、 、 菌 培养基 养 、 养 、 固 、 形 、量 、试fi、 微量fi 葡萄 、 、菌 、试fi 、fi、 球、 量 、 、 、 、 、 氏染色 染 、 、95 乙醇、稀释石炭复红 、小砂轮、痢疾 、青霉素、链霉素、庆大霉素和生理盐 滤 、线绳、香柏、擦42.实验方法 2.1培养基的 备、和菌 培养基 备的一般程序： 调配 矫正pH 分装菌检定保存。 培养基 加” 分装菌检定保存。 培养基 加” 分装 中放在试fi里，然后罩
3、上 ， ，用 扎好 放入讲台边的高压菌桶或高压菌内送到高压菌 刷 。5表1.培养基的 备组号 培养基 量(g) 量(ml) 煮沸(次) 分装(ml) 备注(24人分)1 养 11.4 300 3 ，500ml ， 2,3 养 2.9 75 3 5 15支，中试fi，斜面 6 养 2.0 90 1 3 30支，小试fi， 7,8 固 1.5 50 3 3 15支，小试fi，高层 62.2 菌的分 与培养 2.2.1采用 划线分 法，将取粪便标本中混杂的多种 菌，在伊红美蓝固 培养基表面划线，使之分散成 个 菌，在37培养24h，从而分 出 眼可见的 个菌 。 2.2.2 菌在固 培养基上生长征的
4、观 。观 形成菌的大小、形状、边缘、表面、 性、色素、透明、湿润。 2.2.3 菌的纯培养。粪便标本在伊红美蓝 上，有黑色、 红色两种菌 。挑选这两种不同菌 分别在斜面培养基上 种，标记，在37培养18h。 2.2.4 菌在斜面培养基上生长征的观 。观 菌的生长量、菌苔形状、表面形状、光泽、透明、颜色等。 2.2.5 培养基 种法。用 种currency1在固 或斜面培养基上挑选黑色和 红色菌苔少许移入 培养基fi中，在 近 面的fi壁上轻轻研磨，并沾取少量 调和，使菌 混合于培养基中，混匀。在35培养46h，观 菌的生长情况 72.3 菌个 形态征的观 2.3.1取两块，在每块上加生理盐 3
5、4ul，2滴，在斜面培养基上取黑色菌苔少许1mm小菌 的 量 与第一块上的一滴盐混匀，再取 红色菌苔少许 1mm小菌 的 量 与第二块上的一滴盐 混匀，涂成1cm2；做好标志。经在空 中 后，再用 其 固定。 2.3.2 染色。用 以上两块 固定的 染1分 ， ；再用 染1分 ， ；然后用95 乙醇 其 色 20 ， ； 后用稀释复红复染1分 ， ； ，在微 检。 82.4 菌生 应 定 2.4.1糖发酵试验。用接种针分别挑少许紫黑色和粉红色的细菌接种到葡萄糖发酵微量管和乳糖发酵微量管中，将微量管放在平皿盖内，在37下，培养24小时，观察其产酸产气情况。 2.4.2细菌药物敏感性试验。接种环分
6、别取紫黑、粉红色两种菌液36ul2环，各自在两个平板上，作平板密集划线接种细菌（纱窗样）。设计三点，三点之间等边三角距离，点距离平皿边缘约15mm。作标记：青、链、庆。镊子火焰消毒，夹取相应的药物纸片，平贴在已设定的位置上， ， 镊子火焰 菌。371 24小时培养，观察 。 2.4.3 接种 。接种针 取紫黑和粉红色的细菌，各自接种 两个 培养 ， 培养 中 ， ，到培养 4 5 ， 的 线， 接种针。在37下培养24小时，观察 。 2.4.4currency1片集“应。取currency1片1，fi和fl 各15ul，2。用接种环挑取少许紫黑色菌和粉红色菌，各自上 液液，观察 93.实验 3.1 菌在固 培养基上生长征的观 。 将粪便标本用 分 划分法 种于伊红美 培养 上，培养出黑色和 红色两种菌 。(见 一)10 3.2 染色检。 取黑色和 红色菌涂， 染色， 检。黑色菌 染色 性，长杆状。色菌 染色 性， 杆状。 见二，
