1、常用培养基配方 目 录 ： 01糖发酵管 02 ONPG培养基 03西蒙氏柠檬酸盐培养基 04缓冲葡萄糖蛋白胨水 (MR和 VP 试验用 ) 05克氏柠檬酸盐培养基 06丙二酸钠培养基 07葡葡糖铵培养基 08 Hugh-Leifson 培养基 (O/F试验用 ) 09 马尿酸钠培养基 10营养明胶 11苯丙氨酸培养基 12 氨基酸脱羧酶试验培养基 13蛋白胨水 (靛基质试验用 ) 14 硫酸亚铁琼脂 (硫化氢试验用 ) 15 尿素琼脂 16 氰化钾 (KCN)培养基 17 氧化酶试验 18 硝酸盐培养基 19 细胞色素氧化酶试验 20 过氧化氢酶试验 21 过氧化物酶试验 22 磷酸盐缓冲液
2、 23明胶磷酸盐缓冲液 24 乳酸 -苯酚溶液 25 肉浸液肉汤 26肉浸液琼脂 27牛肉 (或牛心 )消化汤 28血消化汤 29豆粉琼脂 30血琼脂 31营养琼脂 32营养肉汤 33 乳糖胆盐发酵管 34乳糖发酵管 35 EC 肉汤 36 缓冲蛋白胨水 (BP) 37 氯化镁孔雀绿增菌液 (MM) 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液 (TTB) 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液 (换用方法 ) 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液 (SC) 41 GN 增菌液 42 肠道菌增菌肉汤 43 亚硫酸铋琼脂 (BS) 44 DHL琼脂 45 HE琼脂 46 SS 琼脂 47 WS 琼脂 48 麦康凯琼脂 49 伊红美蓝琼
3、脂 (EMB) 50三糖铁琼脂 (TSI) 51 三糖铁琼脂 (换用方法 ) 52 克氏双糖铁琼脂 (KI) 53 克氏双糖铁琼脂 (换用方法 ) 54 葡萄糖半固体发酵管 55 5%乳糖发酵管 56 CAYE培养基 57 Honda氏产毒肉汤 58 Elek 氏培养基 (毒素测定用 ) 59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基 60 胰蛋白胨水 61 Rustigian 氏尿素培养液 62 氯化钠 结晶紫增菌液 63 氯化钠蔗糖琼脂 64 嗜盐菌选择性琼脂 65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂 66 氯化钠血琼脂 67 3.5%氯化钠生化试验培养基 68 改良磷酸盐缓冲液 (小肠结肠炎耶尔森氏菌专用 )
4、 69 CIN-1培养基 70 嗜盐性试验培养基 01 糖发酵管 成分 : 牛肉膏 5g 蛋白胨 10g 氯化钠 3g 磷酸氢二钠 (Na2HPO412H2O) 2g 0.2%滇麝香草酚蓝溶液 12mL 蒸馏水 1000mL pH7.4 制法 : 1葡萄糖发酵管按上述成分配好后 ,按 0.5%加入葡萄糖 ,分装于有一个倒置小管的小试管内 ,121 高压灭菌 15min. 2其他各种糖发酵管可按上述成分配好后 ,分装每瓶 100mL,121 高压灭菌 15min.另将各种糖类分别配好 10%溶液 ,同时高压灭菌 .将 5mL糖溶液加入于 100mL培养基内 ,以无菌操作分装小试管 . 注 :蔗糖
5、不纯 ,加热后会自行水解者 ,应采用过滤法除菌 . 试验方法 :从琼脂斜面上挑取小量培养物接种 ,于 36 1 培养 ,一般观察 2 3d.迟缓反应需观察 14 30d. 02 ONPG 培养基 成分 : 邻硝基酚 -D-半乳糖昔 (ONPG) 60mg (O-Nitrophenyl-D-galactopyranoside) 0.01mol/L磷酸钠缓冲液 (pH7.5) 10mL 1%蛋白胨水 (PH7.5) 30mL 制法 :将 ONPG溶于缓冲液内 ,加入蛋白胨水 ,以过滤法除菌 ,分装于 10mm75mm试管 ,每管 0.5mL,用橡皮塞塞紧 . 试验方法 :自琼脂斜面上挑取培养物 1
6、满环接种 ,于 361 培养 1 3h和 24h观察结果 .如果 -半乳糖苷酶产生 ,则于 1 3h变黄色 ,如无此酶则 24h不变色 . 03 西蒙氏柠檬酸盐培养基 成分 : 氯化钠 5g 硫 酸镁 (MgSO47H2O) 0.2g 磷酸二氢铵 1g 磷酸氢二钾 1g 柠檬酸钠 5g 琼脂 20g 蒸馏水 1000mL 0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mL pH6.8 制法 :先将盐类溶解于水内 ,校正 pH,再加琼脂 ,加热溶化 .然后加入指示剂 ,混合均匀后分装试管 ,121 高压灭菌 15min.放成斜面 . 试验方法 :挑取少量琼脂培养物接种 ,于 361 培养 4d,每天观察结果 .
7、阳性者斜面上有菌落生长 ,培养基从绿色转为蓝色 . 04 缓冲葡萄糖蛋白胨水 (MR和 VP 试验用 ) 成分 : 磷酸氢二钾 5g 多胨 7g 葡萄糖 5g 蒸馏水 1000mL pH7.0 制法 :溶化后校正 pH,分装试管 ,每管 1mL,121 高压灭菌 15min. 甲基红 (MR)试验 :自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中 ,于 361 培养 2 5d,哈夫尼亚菌则应在 2225 培养 .滴加甲基红试剂一滴 ,立即观察结果 .鲜红色为阳性 ,黄色为阴性 .甲基红试剂配法 :10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中 ,然后加入 20mL蒸馏水 . V-P 试验 :用琼脂培养物接种本
8、培养基中 ,于 361 培养 2 4d.哈夫尼亚菌则应在 22 25 培养 .加入 6%-萘酚 -乙醇溶液 0.5mL和 40%氢氧化钾溶液 0.2mL,充分振摇试管 ,观察结果 .阳性反应立刻或于数分钟内出现红色 ,如为阴性 ,应放在 361 下培养 4h再进行观察 . 05克氏柠檬酸盐培养基 成分 : 柠檬酸钠 3g 葡萄糖 0.2g 酵母浸膏 0.5g 单盐酸半胱氨酸 0.1g 磷酸二氢钾 1g 氯化钠 5g 0.2%酚红溶液 6mL 琼脂 15g 蒸馏水 1000mL 制法 :加热溶解 ,分装试管 ,121 高压灭菌 15min.放成斜面 . 试验方法 :用琼脂培养物接种整个斜面 ,在
9、 361 培养 7d,每天观察结果 .阳性者培养基变为 红色 . 06 丙二酸钠培养基 成分 : 酵母浸膏 1g 硫酸铵 2g 磷酸氢二钾 0.6g 磷酸二氢钾 0.4g 氯化钠 2g 丙二酸钠 3g 0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL 蒸馏水 1000mL pH6.8 制法 :先将酵母浸膏和盐类溶解于水 ,校正 pH后再加入指示剂 ,分装试管 ,121 高压灭菌 15min. 试验方法 :用新鲜的琼脂培养物接种 ,于 361 培养 48h,观察结果 .阳性者由绿色变为蓝色 . 07 葡葡糖铵培养基 成分 : 氯化钠 5g 硫酸镁 (MgSO47H2O) 0.2g 磷酸二氢铵 1g 磷酸氢二钾
10、 1g 葡萄糖 2g 琼脂 20g 蒸馏水 1000mL 0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mL pH6.8 制法 :先将盐类和糖溶解于水内 ,校正 pH,再加琼脂 ,加热溶化 ,然后加入指示剂 ,混合均匀后分装试管 ,121 高压灭菌 15min,放成斜面 . 试验方法 :用接种针轻轻触及培养物的表面 ,在盐水管内做成极稀的悬液 ,肉眼观察不见混浊 ,以每一接种环内含菌数在 20 100之间为宜 .将接种环灭菌后挑取菌液接种 ,同时再以同法接种普通斜面一支作为对照 .于 361 培养 24h.阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长 ;阴性者不生长 ,但在对照培养基上生长良好 .如在葡萄糖铵斜面
11、生长极微小的菌落可视为阴性结果 . 注 :容器使用前应用清洁液浸泡 .再用清水 ,蒸馏水冲洗干净 ,并用新棉花做成棉塞 ,干热灭菌后使用 .如果操作时不注意 ,有杂质污染时 ,易造成假阳性的结果 . 08 Hugh-Leifson培养基 (O/F 试验用 ) 成分 : 蛋白胨 2g 氯化钠 5g 磷酸氢二钾 0.3g 琼脂 4g 葡萄糖 10g 0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL 蒸馏水 1000mL pH7.2 制法 :将蛋白胨和盐类加水溶解后 ,校正 pH 至 7.2.加入葡萄糖 ,琼脂煮沸 ,溶化琼脂 ,然后加入指示剂 .混匀后 ,分装试管 ,121 高压灭菌 15min,直立凝固备用
12、. 试验方法 :从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种 ,同时接种两支培养基 ,其中一支于接种后滴加溶化的 1%琼脂液于表面 ,高度约 1cm,于 361 培养 . 09 马尿酸钠培养基 成分 : 马尿酸钠 1g 肉浸液 100mL 制法 :将马尿酸钠溶解于肉浸液内 ,分装于小试管内 ,并于管壁画一横线 .以标志管内液面高度 ,高压灭菌 12120min. 试剂 :三氯化铁 (FeCl36H2O)12g,溶于 2%盐酸溶液 100mL中即成 . 试验方 法 :用纯培养物接种 ,于 42 培养 48h,观察培养液是否到达试管壁上记号处 ,如不足时 ,用蒸馏水补足至原量 .经离心沉淀 ,吸取上清液 0.
13、8mL,加入三氯化铁试剂 0.2mL,立即混合均匀 ,经 10 15min,观察结果 . 结果 :出现恒久之沉淀物为阳性 . 10营养明胶 成分 : 蛋白胨 5g 牛肉膏 3g 明胶 120g 蒸馏水 1000mL pH6.8 7.0 制法 :加热溶解 ,校正至 pH7.4 7.6,分装小管 ,121 高压灭菌 10min,取出后迅速冷却 ,使其凝固 .复查最终 pH应为 6.8 7.0. 试验方法 :用琼脂培 养物穿刺接种 ,放在 22 25 培养 ,每天观察结果 ,记录液化时间 .或放在 36士 1 培养 ,每天取出 ,放冰箱内 30min后再观察结果 . 11苯丙氨酸培养基 成分 : 酵
14、母浸膏 3g DI-苯丙氨酸 (或 L-苯丙氨酸 1g) 2g 磷酸氢二钠 1g 氯化钠 5g 琼脂 12g 蒸馏水 1000mL 制法 :加热溶解后分装试管 ,121 高压灭菌 15min,使成斜面 . 试验方法 :自琼脂斜面上挑取大量培养物 ,移种于苯丙氨酸琼脂 ,在 361 培养 4h或 18 24h.滴加 10%三氯化铁溶液 2 3滴 ,自斜面培养物上流下 ,苯丙氨酸脱 氨酶阳性者呈深绿色 . 12 氨基酸脱羧酶试验培养基 成分 : 蛋白胨 5g 酵母浸膏 3g 葡萄糖 1g 蒸馏水 1000mL 1.6%滇甲酚紫 -乙醇溶液 1mL L-氨基酸或 DL-氨基酸 0.5或 1g/100
15、mL pH6.8 制法 :除氨基酸以外的成分加热溶解后 ,分装每瓶 100mL,分别加入各种氨基酸 :赖氨酸 ,精氨酸和鸟氨酸 .L-氨基酸按 0.5%加入 ,DL-氨基酸按 1%加入 .再行校正 pH至 6.8.对照培养基不加氨基酸 .分装于灭菌的小试管内 ,每管 0.5mL,上面滴加一层液体石蜡 ,115 高压灭菌 10min. 试验方法 :从琼脂斜面上挑取培养物接种 ,于 361 培养 18 24h,观察结果 .氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱 ,培养基应呈紫色 .阴性者无碱性产物 ,但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色 .对照管应为黄色 . 13蛋白胨水 (靛基质试验用 ) 成分 : 蛋白胨 (
16、或胰蛋白胨 ) 20g 氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL pH7.4 制法 :按上述成分配制 ,分装小试管 ,121 高压灭菌 15min. 靛基质试剂 柯凡克试剂 :将 5g对二甲氨基苯甲醛溶解于 75mL戊醇中 .然后缓慢加入浓盐酸 25mL. 欧 -波试剂 :将 1g对二甲氨基苯甲醛溶解 于 95mL95%乙醇内 .然后缓慢加入浓盐酸 20mL. 试验方法 :挑取小量培养物接种 ,在 361 培养 1 2d,必要时可培养 4 5d.加入柯凡克试剂约 0.5mL,轻摇试管 ,阳性者于试剂层呈深红色 ;或加入欧 -波试剂约 0.5mL,沿管壁流下 ,覆盖于培养液表面 ,阳性者于液面接触处呈
17、玫瑰红色 . 注 :蛋白胨中应含有丰富的色氨酸 .每批蛋白胨买来后 ,应先用已知菌种鉴定后方可使用 . 14 硫酸亚铁琼脂 (硫化氢试验用 ) 成分 : 牛肉膏 3g 酵母浸膏 3g 蛋白胨 10g 硫酸亚铁 0.2g 硫代硫酸钠 0.3g 氯化钠 5g 琼脂 12g 蒸馏水 1000mL pH7.4 制法 :加热溶解 ,校正 pH,分装试管 ,115 高压灭菌 15min,取出直立候其凝固 . 试验方法 :挑取琼脂培养物 ,沿管壁穿刺 ,于 361 培养 1 2d,观察结果 .产硫化氢者使培养基变为黑色 . 注 :肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生 ,应采用三糖铁琼脂或本培养基 . 15 尿素琼脂
18、 成分 : 蛋白胨 1g 氯化钠 5g 葡萄糖 1g 磷酸二氢钾 2g 0.4%酚红溶液 3mL 琼脂 20g 蒸馏水 1000mL 20%尿素溶液 100mL pH7.20.1 制法 :将 除尿素和琼脂以外的成分配好 ,并校正 pH,加入琼脂 ,加热溶化并分装烧瓶 .121 高压灭菌 15min.冷至50 55 ,加入经除菌过滤的尿素溶液 .尿素的最终浓度为 2%,最终 pH应为 7.20.1.分装于灭菌试管内 ,放成斜面备用 . 试验方法 :挑取琼脂培养物接种 ,在 361 培养 24h,观察结果 .尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色 . 16 氰化钾 (KCN)培养基 成分 : 蛋白
19、胨 10g 氯化钠 5g 磷酸二氢钾 0.225g 磷酸氢二钠 5.64g 蒸馏水 1000mL 0.5%氰化钾溶液 20mL pH7.6 制法 :将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶 ,121 高压灭菌 15min.放在冰箱内使其充分冷却 .每 100mL培养基加入 0.5%氰化钾溶液 2.0mL(最后浓度为 1:10000),分装于 12mm100mm灭菌试管 ,每管约 4mL,立刻用灭菌橡皮塞塞紧 ,放在 4 冰箱内 ,至少可保存两个月 .同时 ,将不加氰化钾的培养基作为对照培养基 ,分装试管备用 . 17 氧化酶试验 试剂 : 1%盐酸二甲基对苯二胺溶液 :少量新鲜配制 ,干冰箱内避光保
20、存 . 1%-萘酚 -乙醇溶液 . 试验方法 :取白色洁净滤纸沾取菌落 .加盐酸二甲基对苯二胺溶 液一滴 ,阳性者呈现粉红色 ,并逐渐加深 ;再加 -萘酚溶液一滴 ,阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色 .阴性于两分钟内不变色 .以毛细吸管吸取试剂 ,直接滴加于菌落上 ,其显色反应与以上相同 . 18 硝酸盐培养基 成分 : 硝酸钾 0.2g 蛋白 5g 蒸馏水 1000mL pH7.4 制法 :溶解 ,校正 pH,分装试管 ,每管约 5mL,121 高压灭菌 15min. 硝酸盐还原试剂 : 甲液 :将对氨基苯磺酸 0.8g溶解于 2.5mol/L乙酸溶液 100mL中 . 乙液 :将甲萘胺 0.5g
21、溶解于 2.5mol/L乙酸溶液 100mL中 . 试验方法 :接种后在 361 培养 1 4d,加入甲液和乙液各一滴 ,观察结果 .硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色 . 注 :本试验阴性的原因有三 :细菌不能还原硝酸盐 ;亚硝酸盐继续分解 ,生成氨和氮 ;培养基不适于细菌的生长 .如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解 ,可再加入锌粉少许 ,可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色 . 19 细胞色素氧化酶试验 试剂 : 1%盐酸二甲基对苯二胺溶液 . 1%-萘酚 -乙醇溶液 . 试验方法 :取 37 (或低于 37 )培养 20h的斜面培养物一支 ,将两种试剂各 2 3滴 ,从斜面上端滴
22、下 ,并将斜面略加倾 斜 ,使试剂混合液流经斜面上的培养物 .如系平板培养物 ,则可用试剂混合液滴在菌落上 . 结果 :于 2min内呈现蓝色者为阳性 .阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应 ,2min以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果 . 20 过氧化氢酶试验 试剂 :3%过氧化氢溶液 :临用时配制 . 试验方法 :挑取固体培养基上菌落一接种环 ,置于洁净试管内 ,滴加 3%过氧化氢溶液 2mL,观察结果 . 结果 :于半分钟内发生气泡者为阳性 ,不发生气泡者为阴性 . 21 过氧化物酶试验 试剂 :2%儿茶酚溶液 . 3%过氧化氢溶液 . 试验方法 :挑取固体培养 基上菌落一接种环
23、,置于洁净试管内 ,滴加 2%儿茶酚溶液 1mL及 3%过氧化氢溶液 1mL.静置于室温 (20 )中 30 60min,观察结果 . 结果 :阳性反应 ,细菌变为黑褐色 ;阴性反应 ,细菌不变色 . 注 :过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制 . 22 磷酸盐缓冲液 储存液 磷酸二氢钾 34g 1mol/L氢氧化钠溶液 175mL 蒸馏水 825mL pH7.2 制法 :先将磷酸盐溶解于 500mL蒸馏水中 ,用 1mol/L氢氧化钠溶液校正 pH后 ,再用蒸馏水稀释至 1000mL. 稀释液 :取储存液 1.25mL,用蒸馏水稀释至 1000mL.分装每瓶 100mL或每管 10mL,121
24、高压灭菌 15min. 23明胶磷酸盐缓冲液 成分 : 明胶 2g 磷酸氢二钠 4g 蒸馏水 1000mL pH6.2 制法 :加热溶解 ,校正 pH,121 高压灭菌 15min. 24 乳酸 -苯酚溶液 成分 : 苯酚 10g 乳酸 (比重 1.21) 10g 甘油 20g 蒸馏水 10mL 制法 :将苯酚在水中加热溶解 ,然后加入乳酸及甘油 . 用途 :检验真菌形态时用 . 25 肉浸液肉汤 成分 : 绞碎牛肉 500g 氯化钠 5g 蛋白胨 10g 磷酸氢二钾 2g 蒸馏 水 1000mL 制法 :将绞碎之去筋膜无油脂牛肉 500g加蒸馏水 1000mL,混合后放冰箱过夜 ,除去液面之
25、浮油 ,隔水煮沸半小时 ,使肉渣完全凝结成块 ,用绒布过滤 ,并挤压收集全部滤液 ,加水补足原量 .加入蛋白胨 ,氯化钠和磷酸盐 ,溶解后校正 pH7.4 7.6煮沸并过滤 ,分装烧瓶 ,121 高压灭菌 30min. 26肉浸液琼脂 成分 : 肉浸液肉汤 (PH7.4) 1000mL 琼脂 17 20g 制法 :加热溶化琼脂 ,分装烧瓶或试管 ,121 高压灭菌 30min.根据需要 ,倾注平板或放成斜面 . 27牛肉 (或牛心 )消化汤 成分 : 绞碎牛肉 (或牛心 ) 1000g 15%氢氧化钠溶液 27mL 胰蛋白酶 40mL 三氯甲烷 1mL 氯化钠 10g 蒸馏水 2000mL 制
26、法 : 1 称取碎牛肉 ,加蒸馏水 ,隔水加热到 80 ,维持 15min. 2 加氢氧化钠溶液 ,对 pH试纸呈弱碱性 ,冷至 40 . 3 加胰蛋白酶 ,氯仿 ,在 361 放置 4 5h,每小时摇动一二次 . 4 4h后 ,吸取上层液 5mL于试管中 ,加 5%硫酸铜溶液 0.1mL,4%氢氧化钠溶液 5mL,混合之 .若呈红色 ,则不须再消化 ,可由温箱取出 . 5 加入 15%乙酸溶液 45mL,对 pH 试纸呈酸性 . 6 煮沸 15min,使胰蛋白酶破坏 ,冷后 ,放冰箱内一夜 . 7 次日吸取上层清液 ,加氯化钠 10g,并加水补足原量 ,煮沸 . 8 校正 pH7.4 7.6
27、(加 15%氢氧化钠溶液约 10mL),加热 ,用滤纸过滤 ,分装烧瓶 ,121 高压灭菌 20min. 注 : 此培养基可作为琼脂培养基的基础 ,不需加蛋白胨 . 胰蛋白酶之配制 :称取去脂绞碎的猪胰 500g,加入乙醇 500mL,蒸馏水 1500mL,混合之 ,装人玻塞瓶内 .每日摇匀三次 .3d后 ,用绒布过滤挤出其汁 ,加盐酸至 0.05%,放冰箱内保存备用 . 28血消化 汤 成分 : 绞碎猪胃 100g 绞碎猪血块 100g 蒸馏水 1000mL 浓盐酸 10mL 制法 : 1 洗涤猪胃 ,除去油脂 ,保留胃粘膜 ,用绞肉机绞碎 . 2 用绞肉机将猪血块绞碎 . 3 将蒸馏水加热至 55 ,加入猪胃 ,猪血块和盐酸 ,置 55 水浴中 24h,时常加以摇动 .
