1、 硕士学位论文 五龙鹅 MHC 基因克隆、组织表达 及分子特性的研究 目 录 中文摘要 英文摘要 缩略符号 文 献 综述 .1 1 综述前言 .1 2 MHC 分子结构与作用机理 .2 3 畜禽 MHC 的研究概况 .4 4 MHC 与畜禽抗病性关系的研究 .6 研 究内容 1 五龙鹅 MHC class cDNA 基因克隆及序列分析 .9 1.1 试验材料和方法 .9 1.1.1 实验动物 .9 1.1.2 质粒和菌株 .9 1.1.3 主要工具酶及试剂 .9 1.1.4 试验仪器 . 10 1.1.5 所用溶液及其配制 . 11 1.1.6 五龙鹅 MHC class cDNA 基因的扩增
2、和测序 . 13 1.2 结果与分析 . 18 1.2.1 五龙鹅脾脏 Total RNA . 18 1.2.2 五龙鹅 MHC class cDNA 基因扩增 . 18 1.2.3 扩增条件的优化 . 18 1.2.4 插 入片段的转化 . 18 1.2.5 插入片段的检测 . 19 1.2.6 重组质粒的序列测定 . 20 1.2.7 测序结果 . 20 1.3 讨论 . 21 2 五龙鹅 MHC class 基因组 DNA 克隆及序列分析 . 23 2.1 试验材料和方法： . 23 2.1.1 试验材料 . 23 2.1.2 试验方法 . 23 2.2 试验结果分析 . 24 2.2.
3、1 五龙鹅 MHC class 基因组基因的 PCR 扩增与鉴定 . 24 2.2.2 重组质粒的鉴定 . 25 2.2.3 重组质粒测序结果 . 25 2.2.4 五龙鹅 MHC class 基因组基因测序结果分析 . 25 2.3 讨论 . 26 3 利用 Real time-PCR对鹅 MHC class I 基因的检测 . 28 3.1 试验材料和方法 . 28 3.1.1 试验材料 . 28 3.1.2 质粒和菌株 . 28 3.1.3 主要工具酶及试剂 . 28 3.1.4 主要仪器 . 29 3.1.5 试验方法 . 30 3.1.6 五龙鹅 MHC class I 基因逆转录
4、. 30 3.1.7 五龙鹅 MHC class I 基因片段的回收 . 31 3.1.8 重组质粒的构建 . 31 3.1.9 Real tine-PCR 对表达量的检测 . 31 3.2 试验结果分析 . 33 3.2.1 目的基因的 PCR 扩增检测 . 33 3.2.2 目的基因的标准曲线的制备 . 34 3.2.3 目的基因的 Real tine-PCR. 35 3.3 讨论 . 36 4 鹅 MHC class I 基因的 分子特性的分析 . 39 4.1 材料与方法 . 39 4.1.1 试验序列 . 39 4.1.2 序列的提交 . 39 4.1.3 核酸序列的基本分析 . 4
5、0 4.1.4 鹅 MHC class I 蛋白质一级序列的基本分析 . 40 4.1.5 鹅 MHC class I 蛋白质二级结构和功能预测 . 40 4.1.6 鹅 MHC class I 蛋白质三级结构预测 . 42 4.1.7 同源性分析与系统发育分析 . 42 4.2 试验 结果 与 分析 . 43 4.2.1 核酸序列基本分析 . 43 4.2.2 蛋白质一级序列的基本分析 . 44 4.2.3 鹅 MHC class I 蛋白二级结构和功能预测 . 45 4.2.4 鹅 MHC class I 蛋白三级结构和功能预测 . 49 4.2.5 同源性分析 . 50 4.3 讨论 .
6、 51 结 论 . 52 参考文献 . 53 附 录 . 58 致 谢 . 69 Contents Abstract English abstract Abbreviation Key Text Summary .1 1 Summary Preface .1 2 Molecular Structure and mechanism of action of MHC .2 3 General situation of MHC in livestock and poultry .4 4 Research of the Disease Resistant of MHC with livestock a
7、nd poultry.6 1 Cloning and Sequence Determine of MHC class cDNA in Wulong goose 1.1 Materials and methods .9 1.1.1 Experimental animal.9 1.1.2 Vecter and Bacterial strain .9 1.1.3 Tool enzyme and reagent .9 1.1.4 Experimental instrument . 10 1.1.5 Solution and the dispense method. 11 1.1.6 Amplified
8、 and sequence determine of MHC class cDNA in Wulong goose . 13 1.2 Results and analysis . 18 1.2.1 The total RNA of spleen in Wulong goose . 18 1.2.2 Amplified of MHC class cDNA of Wulong goose . 18 1.2.3 Optimizev of the amplified condition . 18 1.2.4 Transform of the insert sequence . 18 1.2.5 Det
9、ection of the insert segment . 19 1.2.6 Sequence determine of the recombine plasmid . 20 1.2.7 Result of the sequence . 20 1.3 Discussions. 21 2 Cloning and the sequence analyse of the genome DNA of MHC class in Wulong goose 2.1 Materials and methods. 23 2.1.1 Experimental materials . 23 2.1.2 Exper
10、imental method . 23 2.2 Results and analysis . 24 2.2.1 Amplified and detection of MHC class genome DNA in Wulong goose. 24 2.2.2 Identify of the recombine plasmid. 25 2.2.3 Sequence result of the recombine plasmid. 25 2.2.4 Analyse the sequence result of the genome DNA in Wulong goose. 25 2.3 Discu
11、ssions. 26 3 Detection of the goose MHC class I gene by the Real time-PCR 3.1 Materials and methods . 28 3.1.1 Experimental materials . 28 3.1.2 Plasmid Vecter and Bacterial strain . 28 3.1.3 Tool enzyme and reagent . 28 3.1.4 Experimental instrument . 29 3.1.5 Method. 30 3.1.6 Reverse transcription . 30 3.1.7 Recovery of the reagent of MHC class I in goose . 31 3.1.8 Construction of the recombine plasmid . 31 3.1.9 Identify the target gene by the Real time-PCR . 31 3.2 Results and analysis . 33 3.2.1 Detection of the target gene. 33 3.2.2 Standard curveof the target gene .
