1、 第六章 个别细胞和组织的培养类型：正常细胞培养肿瘤细胞培养第一节 正常细胞培养正常细胞，在体外培养时都不易生长，建立细胞系更难。正常细胞难培养的原因是它们是分化的细胞，对体外生存条件要求严格.但只要一切条件适当仍有培养成功可能。一、上皮细胞类培养上皮细胞可来源于外、内、中三个胚层；培养中只有源于外和内胚层的细胞能反映出上皮细胞的特征，细胞呈膜状生长的特点。上皮细胞培养有三个难点：需求特殊底物，如在底物上涂有胶原底层则利于细胞生长；需求特殊培养基；与上皮细胞相邻的成纤维细胞常与上皮细胞同时混杂生长，并常压过上皮细胞。纯化和延长上皮细胞生存期是上皮细胞培养的关键之一。(一)表皮细胞培养1特点：
2、在有胶原的底物上易生长； 把人或小鼠表皮细胞培养在以3T3 细胞为饲养层(用 )上时，细胞易生长并可 生一 的分化 。 pH、Ca2+的 和 ， 利于表皮细胞生长。 培养基中 化可的 (10 g/m1)、10-6M的 基 上(Isoproterenol) 和10 ng/m1 表皮生长因 (EGF) 能 表皮细胞生长。 饲细胞 饲细胞(Feeder Cells) 养细胞，是一层过 或 currency1的、用“细胞底物的细胞层。饲细胞用：有同化fi养fl的能 。饲细胞能 “细胞的生长，利于“的成。“成 饲细胞， fl时。饲细胞的：(1)”原培养的人或物胚成纤维细胞，90% 时成细胞 fl，103
3、 细胞/培养；(2)在细胞 时，0.25g/ml 的 ，2ug/105 细胞的 培养中过；或用 ， 30 50 (Gy)；(3)细胞上 currency1 ，Hanks fl 、更 培养fl、培养24 小时， 化细胞成 fl，5104/ml培养基中；(4)48 小时 ， 可用于细胞“之用。2表皮细胞培养 ：(1) ” ：”外 皮或 皮 小，以化层为， 皮 更，切成0.5 1cm2小；(2) EDTA currency1： 0.02 EDTA 中 5 分 。(3) 化： 0.25% 中， 4过；(4) 分：”出皮，用或 把表皮与 皮层分 ；(5) 化：”出表皮 currency1；用剪刀剪成更小的 ，的0.25 中，37 化30 60 分 ；(6)细胞 fl：用吸轻轻反复吹打，使成细胞 fl；(7) 培养fl：通过80 目不锈钢纱网滤过 ， 速心，吸上，直 Eagle fl和20 小牛.(8)培养：碟皿中，CO2 箱培养。
