1、 免疫细胞功能的测定上海交通大学医学院胡翊群主任医师T细胞增殖功能测定基础理论本技术用于评估T细胞对各种刺激的增殖能力。T细胞增殖能力是反映T细胞功能的一个重要指标。免疫细胞功能的测定T细胞功能的测定刺激T细胞增殖的因素及意义1. 特异性抗原： 引起寡克隆活化增殖。克用于判断抗原免疫的效果（疫苗接种）和回忆反应能力，也能反映T细胞总体的功能。2. 丝裂原：多克隆。3. 刺激信号转导分子：多克隆。T细胞增殖功能测定T细胞增殖测定方法1. 显微镜下观察细胞形态与细胞计数。2. 放射性核素掺入试验。细胞增殖时，DNA复制，须从培养液中补充核 。用放射性核素标 培养液中 的 （3HTdR）， DNA复
2、制时， 3HTdR掺入 分裂的细胞的DNA中。细胞增殖 与细胞 掺入的3HTdR的 。通 用液 定 测定培养细胞中的放射性 ， 定T细胞增殖的能力与 。丝裂原 导的增殖反应导T细胞增殖反应的丝裂原1. PHA（ 素）2. Con A（ A）3. PMN（）T细胞增殖功能测定丝裂原 导的增殖反应技术方法1. 用RPMI10currency1PBMC 1x106/ml的“液。2. 用100g/ml的PHA制1:101:20和1:40液。3. 96fifl中 一（12fi），fi中 入100l细胞。指定3fi一。”3分入一种 的PHA液， 一 培养液（对）。4. 37C ，5 CO2，54h。5.
3、制 50ci/ml的3HTdR。T细胞增殖功能测定丝裂原 导的增殖反应6. fi 入50ci 3HTdR，培养18h。7. 用多fi 分fi细胞于一 中。细胞，currency1DNA 上，掺入的3HTdR， 用100 的 ， 。8. currency1放入液 ，计数， 果。9. 本 ，计 一3个复本的 数。T细胞增殖功能测定丝裂原 导的增殖反应因素1. 细胞活力： 技术 细胞活力，复 应 细胞活力。2. 培养液中 的 ： 能激活 制细胞增殖。 测定 体细胞增殖能力， 用活的AB 。3. 细胞培养fl ： 细胞数 用 形 的培养fl。4. 微 ： 细胞增殖能力。T细胞增殖功能测定向混合淋巴细胞
4、培养反应原理T细胞受体能够识 种异 MHC分子。 把2个 个体的 个核细胞 体外混合时， 互刺激，引起增殖。增殖的 与两者之间MHC的差的 。所 种异 混合淋巴细胞反应的 反映2个个体之间MHC差的 ，并且因互识与增殖， 果是2个个体的淋巴细胞增殖能力的总和。这种试验 是双向混合淋巴细胞培养试验。currency1参 反应之一方的 个核细胞用放射性核素射，使其失反应能力，但仍保存刺激能力， 刺激细胞，则此时的反应 果仅反映另一方（反应方）的增殖能力。实质性器官移 时，只需了受者淋巴细胞对 者MHC的反应能力，所 适合 用 向混合淋巴细胞培养反应。T细胞增殖功能测定向混合淋巴细胞培养试验方法1. 分离宿主与 者的PBMC，调整细胞 1 x 106/ml。2. 刺激细胞活：用丝裂霉素（终 25g，37 C ， 5C，30min）放射性核素射（2000 rad）的方法处理刺激细胞。3. 96fifl中，fi 入1x105的刺激细胞和1x105反应细胞。 37C，5CO2，46d。 3HTdR，培养18h。阳性对fi 反应细胞和丝裂原， 刺激细胞。阴性对fi只 射的身细胞。3复本。4. 细胞，液 计数， 果。T细胞增殖功能测定
