1、1 高效液相色谱法具有应用范围广的优点，表现在： （1）HPLC不受试样挥发性和相对分子质量的限制，可用于分离高沸点、相对分子量大、热稳定性差的有机化合物，还可用于各种离子的分离； （2）HPLC不仅可利用被分离组分的极性差别，还可利用组分分子尺寸大小的差别、离子交换能力的差别以及生物分子间亲和力的差别进行分离。它还可以用多种溶剂作为流动相，对于性质和结构类似的物质，分离的可能性比气相色谱法更大； （3）HPLC易于收集流出物组分，可利用制备柱进行较大量的制备。2第一节 高效液相色谱的技术参数 一速率理论 图6-1是气相色谱法和高效液相色谱法的H-曲线。由图可见，两者形状明显不同。HPLC法接
2、近一条直线，而气相色谱法曲线中有一极小 。 图 6-1 GC和HPLC的 H-曲线 3 在HPLC中，由于流动相是液相， 柱效的 GC不 相同。 ，范第 （H = A + B/ + C ）应作 。 在范第 中，HPLC GC的 流 相同。 HPLC的分子 是 同种组分分子由 大的谱 中 较 的两 。它 组分分子的流动相中的 数（Dm） 比， 流动相的线（） 比。 uDCuB md由于液相中 数比气相中小45数量，HPLC中currency1相对于谱 的 可以“不。 4 HPLC的质fi力是由组分在两相间的质fl 不能间 而 的，质fi力相” ：定相质fi力（Hs），动流动相质fi力（Hm）和
3、流动相质fi力（Hsm），: smmsu HHHC 5 气相色谱法 定相的质fi力；液相色谱法 不同，在质fl 中 作用的是流动相质fi力， 别是 流动相的质fi力， ，进定相结构，小 流动相质fi力是高液相色谱柱效的 。 以各 可为： 中CdDm/u相 可以 。于是，可为：H A Cu= +6 高液相色谱法的柱效， 用小而 的定相 ，以小流 和流动相质fi力。 进定相的结构，对于小 流动相质fi力以及定相质fi力 。 ， 用 的流动相（ 、 ）， 有利于小质fi力，高柱效。 7二柱外效应 柱 效应（ extra column effect）是 色谱柱 的 的 ，柱 。它分为柱和柱 两种。1柱
4、前展宽 由进样 。HPLC进样 用两种 ： 进样，试样由流动相 柱 ，进样 有 ， 的 ； 进样，试样 液流中， ，进样 的 和进样液 扰动而 的 ， 的 。 小进样 的 ，者试样直接 中 点中 点以 12mm处，可少柱的 ，使柱效显著高。 82柱后展宽 是由接管和检测 流通池以及检测 应 间 。流动相在接管中 流较大，而管壁附近流较慢，管中 处组分比管壁部分先 检测 ， 的 。尽可能用短的接管，少流通池 ，可以高柱效。 检测 、放大 和记录仪 应较慢， 使描绘的色谱 增加， 高降 ，对于保 较小的组分 尤为突出。 以，进检测 和记录 统的 应 是克服柱的一途径。 9三分离度 色谱法的 问题一，就是难分离组分的分离问题。已出，有效塔板数（neff），是评价柱效应的一 标，相对保 （ris）是量色谱柱 择性的另一 标。但这两 标未能说明难分离组分的真 分离效果。 气相色谱的分离效果可直接表现在色谱的 间距离和 ，只有相邻两色谱 的距离较大、较窄 ，两组分才能得 良好的分离。 综合保 的差 对柱效率的 ， 用分离 作为色谱柱的总分离效能 标，以判断难分离物质对在色谱柱中的分离情况。10 分离 用R表示，定义为：相邻两色谱 保 差 两组分色谱 比 ，：
