1、 第五章 扫描电镜生物样品制备技术常规电镜样品要求：必须是干燥的，不含水分或可挥发性物质；具有一定机械强度，能耐受电子束轰击；具有导电性，被激发时能够产生足够的二次电子。生物材料特点：含水分多，质地柔软，机械强度小；组成元素的原子序数低，导电性差，激发后二次电子的产额较少。制样的任务：通过一系列处理，既要尽量完美地保存材料的固有形态，又要改良其物理性能，使其适合在电镜下观察成像。主要内容：第一节 SEM样品的常规制备技术第二节 特殊要求的扫描制样技术第一节 扫描电镜样品的常规制备技术冷冻 断裂粘样或滴样 熏蒸固定 干燥子 子 样品形 材固定水干燥粘样镜组 取材清洗固定脱水干燥粘样镀膜镜检一 材
2、 ： 观察材料。原 ： 小 1.： 材currency1要“，要。fi：fl材料 ，通过 分 ”， 样品 观察 。2.currency1：保观察 。 械要，不能材料 的。含水分多的 材料 冷冻断裂fi。3. 度小： 足观察 的 小 ， 度 12 4.” ：子 样品 5. 样品要求合适的度：度 成样品 ；度小 。取材清洗固定脱水干燥粘样镀膜镜检二 ：保 的观察 1.完 的制样 序有 次 固定 ： 的 物，保 的观察 。 固定后 ： 固定， 二 反应 削弱 的固定效果。 水 的 ： 固定，固定 水剂反应 产生沉淀，影响观察效果。2. 的 选择：蒸馏水 生理盐水 酶 选择原 ： 的pH值 渗透 温度
3、应该尽量接近样品的生理值，样品fl环境突变 导致形态变化。植物材料：蒸馏水 埃；currency1物材料：渗生理盐水 5%碳 钠或缓冲 ；游 ：用渗的缓冲 (精子 血 微生物)；覆盖 量 的样品(胃 )用低度的蛋白水酶溶 ；组织 养 ：用相应的 养 ；特殊样品：如乳腺组织富含蛋白质 脂 ，分别用16%的甘油 20%乙醇浸泡 ； 蜡质 角质层的样品：用有机溶剂 蜡。 选择fi：取材清洗固定脱水干燥粘样镀膜镜检取材清洗固定脱水干燥粘样镀膜镜检3. fi：不同材料采用不同fi，灵活应用（1）植物材料：根用水冲 泥土，植株用水冲 或滴 。观察气孔状态时应 后 材时机。（2）较干的样品：固定后20倍 的
4、 摇，换 次。（3） 量 的样品：振荡fi或喷射瓶壁 冲 。（4）游 微生物：心fi 。（5）超声波 ：用于 结构复 凹陷 皱折多的样品。样品置 ，超声波 内 ，必须控制功率（6）灌流 ：观察 内壁结构的样品，避血 组织凝聚 影响观察效果。通过currency1脉 入 ，直 排变 止。必须控制 样品 合摇匀 低心（反复 次）取材清洗固定脱水干燥粘样镀膜镜检1.单固定：只用一 固定剂（通常 二）固定的fi。2.熏蒸固定：固 养基上 养的 丝 样品，用 （或甲）蒸汽熏蒸固定0.51小时。3.双固定： 二(13h) (0.51h)4.冷冻固定：氮超低温“冷冻可保存样品的生活状态。5.不固定：干 子
5、子 毛发 样品。四 水：梯度系列 水fi。：根据材料性质 小 调节 水时 。固定fi取材清洗固定脱水干燥粘样镀膜镜检干燥： 样品的 存 （水或 水剂），使样品不含态物质的过 。原fl：态物质 样品 时必须 ，其反用 使样品 结构产生形变。1. 干燥fi：样品的水分或 水剂在 气 蒸发使样品干燥。适 样品： 子 子 果 质 ；游 在 水剂 干燥较。 特点： 。2. 干燥fi：含水分或 水剂样品置于 干燥 内，低 使态物质挥发，使样品干燥。特点：干燥度“，效果 干燥fi相近。3.冷冻干燥fi：超低温“冷冻材 固定 水 制冷剂 粘样氮 取材清洗固定脱水干燥粘样镀膜镜检样品干燥fi4. 点干燥fi（c
6、ritical piont drying method CPD)(1)干燥原理：在 容 ，使态干燥剂变 气态，气态 态物质的 度相时，相 。时态干燥剂的分子内聚 ，时 的 系数 ( 状态)。在 状态下currency1容 ，同时一定度排气 （保 状态），直 排 止。时样品在“ 影响的 状下干燥。使干燥剂气相 相相的温度 该干燥剂的 温度。使干燥剂气相 相相的气 该干燥剂的 强。CO2CO2取材清洗固定脱水干燥粘样镀膜镜检点干燥fi（2）常用干燥剂 剂：常用干燥剂： 剂：既可 干燥剂，又能 水剂相 溶的 ，置换 水剂 后又被干燥剂fi置换。常用 剂：fl 脂，fl 脂。干燥剂：在 点干燥 内 干燥用的 .态CO2 ： , 温度 31.1， 强72.8 气。F12 ： 温度 28.9 ， 强38.1 气。
