1、 实验三 DNA限制性内切酶消化酶切实验原理 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。限制性内切酶 酶分子 识别位点 切割位点 限制作用是否需用 ATP类 三亚基双功能酶 二分非对称 至少在识别位点外 1000bp Yes类 内切酶与甲基化酶分子不在一起4-6bp, 大多数为回文对称结构 在识别位点中或靠近识别位点无特异性No类 二亚基双功能酶 5-7 bp 非对称在识别位点下游 24-26bp Yes限制性内切酶可分为三类类限制性内切酶类酶切割位点在识别序列中，有的在对称轴处切割, 产生平末端的DNA片段(如Sma : 5-
2、CCCGGG-3)；有的切割位点在对称轴一侧，产生带有单链突出末端的DNA片段称粘性末端，如EcoR切割识别序列后产生两个互补的粘性末端。5GAATTC3 5 G AATTC3 3CTTAAG 5 3 CTTAA G5 实验材料和试剂实验材料：玉米基因组DNA实验试剂： BamH I 酶及其酶切缓冲液：购买成品。 SalI酶及其酶切缓冲液：购买成品。 琼脂糖(Agarose)：进口或国产的电泳用琼脂糖均可。 实验仪器恒温水浴锅用手指轻弹管壁使溶液混匀，使溶液集中在管底混匀反应体系后，37水浴保温2-3h电泳 EP管 实验 反应体系 20L酶液DNA 15LBamH 1LSal 1L10BufferT 3L对 DNA酶切反应 限制性内切酶用 可 体系1g DNA 1单位酶, 消化1-2h。酶 酶的用 ，一 2-3 ， ，反应 。 电泳 实验currency1“ 限制性内切酶用 可 体系1g DNA 1单位酶，消化1-2h。酶 酶的用 ，一 2-3 ， ，反应 。 “ 酶切 的DNA溶液体fi能fl ， DNA溶液中其成分 酶反应。 “ 实验制的DNAfi于” ， 酶的使用 。反应液中 的酶 fi合 的， 成，酶液中的 可能 后的反应。 “ 的酶一 ，为 ，使用 可 用酶反应缓冲液 1 进 。 ，酶 保 在50%的 中，实验中，应 反应液中 制在1/10之， 酶 性 。
