1、小鼠骨髓间充质干细胞的原代培养一、立题依据 有利于进行骨髓间充质干细胞的生物学特性的研究 为下一步的传代培养创造条件 可以直接应用于临床实践,是研究骨髓间充质干细胞作用的前提1、小鼠骨髓间充质干细胞原代培养的意义2、骨髓间充质干细胞原代培养的方法 贴壁培养筛选法 密度梯度离心法3、骨髓间充质干细胞的应用前景 在适当的条件下,骨髓间充质干细胞可以分化为三个胚层来源的组织细胞而进行细胞移植的治疗,在体外培养扩增后也可种植于生物材料上,回植入机体修复组织损伤。 骨髓间充质干细胞在治疗组织器官退行性疾病、遗传缺陷性疾病和基因治疗方面也展现了美好前景。二、材料和方法成年小白鼠4只胎牛血清( 清 生物化学
2、 有 白( currency1currency1(“ “ fifl 4 flfl 4 fifl fl 三 fififi 细胞分离( 原三 ”“ fl”fl”fifl 、 (fifi ,fifi “( “fifi 1、材料2、器 fififi (上 于 器有 “ 培养 “fi 三 机 作 “ ( 生物( 离心机( 作 ,血 ,培养3、方法骨髓的收集 Percoll密度梯度离心法分离纯化骨髓间充质干细胞 贴壁培养骨髓间充质干细胞 形态学观察 原代培养细胞生长曲线的测定(一 骨髓间充质干细胞的 学 24 h后就见有细胞贴壁,多数细胞呈圆形 (图1A)72 h后首次半量换液去除未贴壁细胞,此时贴壁的细胞为单个,形态大部分为圆形 (图1B)三、结果结果一第1次换液后57 d可见由几十个到数百个细胞组成的集落,细胞形梭态呈形、三角形或星形 (图1C、D)