1、 教学目标1、学会直接接种法无菌检查的操作。2、懂得无菌检查供试品溶液的制备。 3、熟知无菌检查的结果判断。4、学习薄膜无菌检查法的使用。5、掌握影响无菌检验的因素和解决办法。教学重点：直接接种法无菌检查的操作。教学难点：薄膜无菌检查法的使用。 第五节 直接接种检查技术药品无菌检查法的具体操作方法可分为直接接种法和薄膜过滤法。中国药典（2005年版）指出：如供试品性状允许，应优先采用薄膜过滤法。进行供试品无菌检查时，所采用的检查方法和检验条件应与验证的方法相同。直接接种法即每支（或瓶）供试品按规定量分别接种至各含硫乙醇酸盐流体培养基和改良马 培养基的 中， 规定 ，每 中培养基的用量应 接种的
2、供试品体得 培养基体 的 0 ，同时，硫乙醇酸盐流体培养基每 量 5 ，改良马 培养基每 量 0 。培养基的用量和 同方法验证 每种培养基接种的 同供试品的检验 量。直接接种法具 操作 优点， 别 无 菌和作用药品的无菌检查。，中国药典（2005年版currency1“5种品种（fifl fl ）采用法规定。操作时，用 的 液供试品 或 采用”或试的方法 。如果 定的 ，可用 的无菌 （如 菌过滤 的），供试品 无菌，按无菌操作 出 。无使用 种检查法， 检查操作过 供试品的 接种与培养 。规定 ，供试品 按 品的 同用 方法与接种。 液 溶液供试品 供试品操作 ，规定量的供试品直接无菌操作接
3、种至各 培养基中。2 体制 供试品 规定量的供试试品，无菌操作直接接种至各 培养基中 或供试品中 的溶 溶解，或按标 溶 ，规定量无菌操作接种至各 培养基中。fl 或 供试品 规定量供试品， 量的无菌 溶液或基酸溶液使中和，接种至各 培养基中，或直接接 含 或基酸的各 培养基中。溶性供试品 规定量供试品， ， 量的 酯80或 它 的乳化 稀释 使 乳化，接种至各培养基中。或直接接种至含 酯80或 它 乳化 的各 培养基中。、供试品的 接种5 敷料供试品 规定 量，每 无菌操作拆， 同currency1位剪约100 mg或cm3cm 的供试品 接种 各 足 ”供试品的 量培养基中。6 肠线、缝
4、线 供试品 肠线、缝 线它 次性的医用料按规定量小，无菌拆 ，接种 各 足 ”供试品的 量培养基中。 灭菌医用 具供试品 规定量，必要时应将 拆散或切成小碎块，接种 各 足 侵供试品的 量培养基中。8 放射性药品 供试品1瓶（支），接种 量为7 5ml的硫乙醇酸盐流体培养基和改良马 培养基中。每 接种量为0 2ml。接种阴性 与此同时 支硫乙醇酸盐培养基 ，上述同 的供试品稀释液或0 灭菌氯化钠溶液 ，作阴性 。（作阴性 的目的是 未接检品前的培养基和供试品稀释液 无菌检查操作都是无菌生长的，而供试品阳性检出的菌确是来自检品。）如供试品液未经验证试验，可同进行，方法见第五节的直接接种法的验证试
5、验。接种阳性 根GMP和中国药典要求，接种阳性 应在阳性 室中进行， 交叉污染。接种时应按验证试验的结果选择阳性 菌。方法是：在相应的培养基中接 小 00 cfu的阳性 菌（菌液的制备和同培养基灵敏 检查菌液的制备相同）。供试品用量同供试品无菌检查每份培养基接种的 品量（见62、6fl）相同。阳性 培养82 h应生长良好。、培养 培养基按规定的温 培养 d逐日 并记录浑浊新鲜培养基或划线斜培养基培养液涂片，染色，镜检判断是否 菌三、结果判断供试品 规定 培养基 ，或虽显浑浊但经确证无菌生长供试品规定培养基 中任 显浑浊并确证 菌生长能充分证 生长的微生 供试品所含。满足至条件时，判试验结果无效： 无菌检查试验相关设施的微生监控 规定。 无菌试验过 的回顾，揭示了本操作 序是错误的。 阴性 菌生长。 供试品 中生长的微生经鉴定 ，确证微生生长是因无菌试验中所使用的品和（或）无菌操作技术 的。试验 经确 无效，应重试。重试时，重新同量供试品， 法重试， 无菌生长，判供试品 规定 菌生长，判供试品 规定。直接接种法 示无 菌作用的供试品接种 培养基硫乙醇酸盐流体培养基 改良马 培养基 培养
