1、 蛋白质综合实验蛋白质浓度测定介绍 四种古老的经典方法: 定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。新的测定法: 考马斯亮蓝法（Bradford法）。 还有近来广为应用的蛋白定量方法BCA法。在选择方法时应考虑实验对测定所要求的灵敏度和精确度；蛋白质的性质；溶液中存在的干扰物质；测定所要花费的时间。紫外吸收法 较为灵敏； 快速；510分钟； 原理：蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收. 干扰物质：各种嘌吟和嘧啶；各种核苷酸 说明：用于层析柱流出液的检测；不消耗样品，测定后样品仍 收 用.BCA（2,2- -4,4- 酸 ）法原理： 在 性
2、 蛋白质 Cu2+ 合 Cu2+还原 Cu1+。 分 的BCA(在BCA 应液中） 合 Cu1+ ， 紫色的 应 合物。 溶性的 合物在562nm处 的吸光性。：灵敏度; 较快速40分钟；干扰物质： 合剂；浓度的还原剂 说明：干扰 currency1 ， 蛋白不“的性蛋白质含量的测定（Lowry法）实验的1.fi和fl 蛋白质量测定的原理fl 酚法（” 法）测定蛋白质浓度的 原理蛋白质有 的(CONH)，有双缩 应，在 性溶液中， Cu2+ 紫 色合物。Folin酚 应在双缩 应的基， Folin试剂(酸酸试剂)，蛋白质 合物 还原酸酸试剂， 蓝色物质。在 定 ，蓝色 度 蛋白质的量 。 法的
3、 、灵敏度、较紫外吸收法灵敏1020 ，较双缩法灵敏100 。 不 处 应 种干扰。 操作方法蛋白的测定和 试 1 2 3 4 5 6 7蛋白 (mL) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 (mL) 1.00.9 NaCl(mL) 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 性 溶液(mL) 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 后 20 min。酚试剂(mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 ，30min后0试为 白对 ，在650nm处 色 .OD650为 ， 蛋白量为 ，在 原的 。求算 中的蛋白质浓度 查： 用测定读数在 查出蛋白量（X），最后如 算出 的蛋白量：g X*（100/0.002）*10-6 和测定的吸光数，按 列公式计算：g （OD 测定 /OD * 蛋白量）*（100/0.002）
