1、西妥昔单抗联合热疗与放疗诱导人鼻咽癌细胞株CNE凋亡实验研究麻发强 黄勇攀贵阳医学院第二附属医院贵阳医学院 西妥昔单抗(Cetuximab) 是一种特异性针对EGFR的单克隆抗体,与EGFR结合可阻断其自身受体相关激酶的活化与磷酸化以及有丝分裂信号的下传,抑制肿瘤细胞的增殖、生长和诱导凋亡。前 言 2006年美国FDA批准C225作为二线方案治疗 的 癌。 对鼻咽癌治疗 的作 一 的 。 实验 研究西妥昔单抗联合热疗与放疗诱导人鼻咽癌细胞株凋亡的 和可 的 制。前 言一、 与方 细胞 人鼻咽癌细胞株CNE 国 学院 细胞, 0currency1的R“60fifl , ,5C2” 5 传 。验分
2、细胞胞 作0 m的西妥昔单抗0 5 , ,放疗2G 。 热疗0mi , 2 和 。实验分et 25 细胞凋亡 的 0mm2 , 种细胞 50 0 ,前2 ,“ 洗两遍固定 固定 et25(5mL) 双蒸水冲洗,封 显微镜下 并 拍。流式细胞术检测各CNE的凋亡率 取对数生长 的CNE细胞,每25 m2的 瓶 种206个细胞,每设个平 样 ,分别经规定的因素,消化收集细胞, i di 缓冲 00重悬,调整细胞密为 06m5 A exi V-FTC ,混匀, 避孵育5mi 0“ 20m , 避孵育 5mi 流式细胞仪检测, 2和应 流式细胞仪检测细胞凋亡。Weter t分析 ax、 -2蛋白的表达 加含PMSF裂解液冰上裂解30min提取蛋白,4 12000rpm离心5min,取上清,蛋白定量后调整至浓度相同,95变性5min,8%聚丙烯胺凝胶电泳2h,后转移至PVDF膜,5%脱脂奶粉封闭1h。 一抗(分别为1:200稀释的Bax、Bcl-2、-actin抗体)4过夜,TBST洗膜3次(每次5min)。