1、 免疫细胞分离和保存技术 意义床上的各 型的免疫缺陷、自身免疫病以及 瘤等临 种类 肿疾病均可出 淋巴 胞或淋巴 群的 量和功能的 化。因现 细 亚 数 变此用体外方法 机体具有免疫反 的外周血淋巴 胞及其对 应 细 亚群的 目或比例以及 所 示的功能的强弱 行 ，是数 它们 显 进 检测判断机体细胞免疫水平的一 重要手段。 于 床 疾种 这对 临 认识病、探 其 病机制、 察病情 化、判 后、考核 效讨 发 观 变 断预 疗和防治疾病等方面均有重要意 。义 要求分离的淋巴细胞纯度高、产量多，而且不丧失活性，同时也要求分离技术简单、操作方便。 细胞分离基本原理不同细胞密度不同不同细胞表面生物学
2、特性不同不同细胞表面分化抗原不同血液中红细胞与白细胞比例约为6001000：1，两者的比重不同其沉降速度也不同，通常用两种方法加以分离。（直立静置RT3060min，紧贴红细胞层上的白膜层）一、白细胞的分离1、自然沉降法外周血， 抗凝，静置约一小时血液分为三层，上层为血浆，底层为红细胞，紧贴红细胞层上面的灰白层为WBC，轻轻吸取此层即可得到富含WBC 液， RBC， 即可。法 0.83% 法。2、 加速沉 法高分 （ 、 、currency1“fi）可fl红细胞凝 ，加速红细胞沉降，fl与白细胞分离。 法的细胞得比自然沉降法高。二、外周血单个核细胞分离外周血单细胞（peripheral blo
3、od mononuclear cell)主要指淋巴细胞和单核细胞，是免疫学实验中最常用的细胞群。密度为1.0751.090 。人的红细胞密度为1.093 粒细胞密度为1.092 单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的密度为1.075-1.090 常用的分离”为：FicollPercoll分离”1、 Ficoll分层液要用分离外周血中的单细胞，一种单 度度离分离法。其要 分为 (为Ficoll )其度为1.020。可血液分 层，上到 ：血浆、单细胞、细胞红细胞。Ficoll ：2 6% （ficoll) 液 + 1 34% （hypaque) 液。人外周血单个核细胞（ ， ）的分离聚蔗糖-泛影葡胺 2、Percoll分层液一种 度 度离分离法，其要 分为： ，其液度为：1.135。 currency1“（polyvinyl pyrolidone,PVP) 的 小不一的 液。高速离 ， 度 度（ 而上的的 度 度，density gradient），可度不同的细胞分离纯 。可血液分 层，上到 ： 细胞血小 、单细胞、淋巴细胞、细胞红细胞。淋巴细胞纯度98%, 单细胞纯度78%。 长, 步骤繁, 高。
