1、组会汇报 多杀菌素高产菌株发酵方面 研究现状 汇报人：王美玲 指导导师：卢文玉 - 多杀菌素的理化性质 刺糖多孢菌的诱变 发酵工艺优化 分批发酵动力学研究 多杀菌素类化合物是由 刺糖多孢菌 经 有氧发酵后的 次级代谢产物 。本质上属 大环内酯类 化合物，且没有 抑菌活性 。纯多杀菌素包含 6种成分，其中组分 A和 D的活性最高。 刺糖多孢菌的培养温度约为 24-32 ，而产素的最适温度为 28-30 。大规模发酵时应通过通气量和搅拌速度来维持罐内溶解氧在 60以上，最好为 65以上 。罐内压力为0.034Mpa 复壮 单孢子悬液 诱变 /抗性物质 单菌落筛选 初筛 复筛 测定稳定性、菌态、性状
2、 高产菌株 发酵条件优化 培养基优化 1、 诱变 突变株 ： 菌丝 诱变 、 萌发孢子诱变： 单一诱变和复合诱变 2、 抗性 突变株： 多杀菌素抗性突变株：（双层培养法筛选） 鼠李糖（ 初级 代谢终产物、 前体 ） 3、 耐代谢产物结构类似物 突变株： 庆大霉素、红霉素、安普霉素 4、诱变和抗性结合（多重迭代） 5、耐 C源分解代谢物阻遏突变 2-脱氧 -D-葡萄糖 6、原生质体融合技术 诱变剂 无论化学诱变剂还是物理诱变剂，单独使用很少能收到预期的效果。所以生产中多采用 几种诱变剂复合处理、交叉使用的方法 UV 和氯化锂 (LiCl)复合诱变，硫酸二乙酯 ( D E S ) 诱变，亚硝基胍（
3、 N T G） 诱变， D E S和 LiCl 复合诱变， 60Co g 及 137Cs g 诱变 、 微波诱变 、 LiCl 本身无诱变作用 原生质体制备条件和再生研究 （ 1）菌丝生长曲线 （对数中 期） （ 2） Gly对再生的影响（干扰细胞壁的形成） （ 3）溶菌酶、蜗牛酶、纤维素酶浓度、作用时间、温度的影响（渗透压、稳定剂 ， Nacl、蔗糖） （ 4）原生质体的灭活（热、紫外） （ 5）融合 ： （ 种间 和种内， 与红色糖多孢菌 ？） （不同分子量和浓度 PEG、 电融合 ） （ 6）再生培养基的选择 （ 琼脂浓度） 培养基的优化 （发酵和种子培养基） （ 1） 单一 C（ N）
4、源、复合 C（ N）源、有（无）机氮源、微量元素、均与设计实验、正交试验 （ 2） 响应曲面法 单因素试验 P-B试验 SAS软件分析 显著因素 中心组合设计 响应面回归分析 三维图 最优方案 （ 3）研究 C/N比对 菌丝形态和产量 的影响（红霉素） （ 4）搜集剂（磷钙、沸石）对产量和 PH影响 （铵离子） 发酵条件优化 1、种子液的影响 接种量、种龄 2、摇瓶发酵条件的优化 发酵周期 的确定 消前 pH、摇瓶转速以及摇瓶装量 进行正 交设计实验 变温（ 4/5d） 对产素的影响 (不 )加玻璃珠 对生物量和产量的影响 3、初始浓度葡萄糖、磷酸盐对菌体和产量的影响，磷酸盐对葡萄糖的利用的影响 葡萄糖效应：补糖时间的确定 （ 流加） 4、补加前体物质的影响：加入时间和量 5、接种方式的影响：种子（挖块、菌丝、孢子）、发酵（一级和二级种子）（ 阿维霉素 ） 6、短链脂肪酸（乙酸、丙酸等）作为缓效碳源加入时间的确定及影响 7、 DO、 OUR、 CER、 RQ的相关分析 8、硝酸铵 （促进生长，降低产量）、 磷酸二氢钾（ 调节 PH，ATP、磷酸酶） 、正丙醇的影响 9、混合脂肪酸代替豆油 （螺旋霉素） 10、流加补料的时间、速率， 分批补料
