1、 中药青皮汤复方拆煎对其总黄酮含量的影响 研究报告 项目负责人：彭学东 项目承担单位：齐鲁医药学院 联系方式： 13583141161 目录 第一章 绪论 . 1 1.1 研究背景 . 1 1.2 研究目的 . 3 1.3 研究意义和价值 . 3 1.4 研究方法 . 3 1.5 研究创新点 . 4 第二章 复方水煎液样品的制备 . 5 1.1 水煎液样品制备 . 5 1.2 水煎液样品浸膏得率 . 5 第三章 薄层色谱法定性分析 . 6 1.1 溶液制备 . 6 1.1.1 对照品溶液制备 . 6 1.1.2 水煎液样品溶液制备 . 6 1.2 薄层定性分析 . 6 第四章 紫外 -可见分光
2、光度法测定总黄酮含量 . 7 1.1 对照品溶液的制备 . 7 1.2 供试品溶液的制备 . 7 1.3 测定波长的选择 . 7 1.4 标准曲线的绘制 . 8 1.5 方法学考察 . 9 1.5.1 精密度考察 . 9 1.5.2 稳定性考察 . 9 1.5.3 重复性考察 . 10 1.5.4 加样回收试验 . 10 1.6 总黄酮测定 . 11 第五章 结论与展望 . 12 1.1 结论 . 12 1.2 展望 . 13 参考文献 . 14 1 第一章 绪论 1.1 研究背景 从上个世纪 90 年代以来，我国的药学研究重点已从仿制药物转向创新药物的研究。在西药研究方面，西方国家实力雄厚，
3、投资很大，目前技术先进，短时期内难以在和西方大制药公司的竞争中取得优势。相对西药来讲，中药及复方经过了数千年的临床使用和验证，疗效确切，而且我国具有自己独特的中医学理论，它是中华民族的宝贵财 富，为中华民族的繁衍昌盛做出了巨大贡献。此外， 1997 年，以国家科技部 牵头，由卫生部、 国家食品药品监督管理局 、 国家中医药管理局 等部门参加，成立了国家新药领导小组，组织全国百余名专家提出了 中药现代化 发展的规划，启动实施了中药现代化工作，而且中医药现代化工作已经取得了重要进展。中药现代化在提高人民健康水平、增加农民收入、保护生态环境等方面也发挥了显著作用。 中药复方制剂在临床上最常使用的剂型
4、目前主要还是水煎剂，而且越来越多的学者开始对复方水煎液中的成分进行相关研究。 青皮汤药物组成为 青皮 、 陈皮 、 莪术 、 三棱 、 神曲 、 延胡索 ，具有 理气健脾 、消积化聚的功效，临床上用来治疗脘腹 痞满 胀痛 、内有症积的症状，而且疗效确切显著。 青皮汤中的君药为青皮，是一味常用中药，性味苦辛、微温，有破气行痰，消痞除满之功效。中医用煎剂内服治疗胸肋胀痛、胃部痞满、疝气、食积、乳肿、乳核等症，是一种药用广泛又经济的中药。其主要含挥发油，黄酮类化合物和氨基酸类化合物 1，对心血管、消2 化和呼吸系统等有广泛的药理作用。现代研究表明采用紫外分光光度法对青皮中的总黄酮进行测定 ,采用橙皮
5、苷为指标成分测定总黄酮的含量，方法稳定、重复 性好，准确度高、仪器设备操作简单等优点。可作为青皮药材的质量控制方法 2-3。 陈皮中主要化学成分黄酮类，柠檬苦素类，生物碱类，挥发油，及微量元素等。现代药理研究表明其对心血管系统、消化系统等都具有良好的作用，具有升压、抗血小板聚集、抗氧化、抗衰老、强心、抗休克、抗过敏、抗菌、抗肿瘤等作用 8-10。 莪术中主要含姜黄素和挥发油类化合物。莪术及其提取物的药理作用主要表现为抗肿瘤、抗病毒、抗炎镇痛，并同时能升高白细胞等。 三棱中含黄酮类，皂苷类，有机酸类和挥发油类化合物，主要化学成 分为三棱双苯内酯、三棱二苯乙炔、刺芒柄花素、胡萝卜苷棕榈酸酯等。具有
6、破血行气、消积止痛的功效，在治疗癥瘕痞块，痛经，瘀血经闭，胸痹心痛，食积胀痛等方面有较好的疗效 4-6。 神曲为酵母制剂。其主要化学成分有维生素 B 复合体、麦角甾醇、挥发油和蛋白酶等。现代药理研究证明，神曲含有消化酶，可加强对食物的消化吸收；并含 维生素 B1，可增加胃肠蠕动，增强其推进功能，促进消化液分泌，起到助消化，除胀满的功效 11。 延胡索中主要含延胡索甲素、延胡索乙素、四氢黄连碱、去氢紫堇碱等成分。延胡索具有镇痛，催眠镇静的作用，能使肌肉松弛，还能抑制胃酸分泌，对心脑血管系统也有一定药理作用 7。 现代药理研究表明，橙皮苷等黄酮类化合物对胃肠平滑肌有较好3 的松弛作用，可以治疗腹
7、痞满 胀痛 。所以，青皮汤中的橙皮苷等黄酮类化合物是其发挥药效的主要有效成分之一。 目前对青皮汤化学成分和药效作用的研究较少，具有很大的研究价值。因此本实验主要对青皮汤复方的药物配伍组成对其水煎液中黄酮类成分的影响，从化学成分的角度解释其药物配伍规律，为科学的、定性定量的现代研究奠定一定的基础。 1.2 研究目的 本次实验通过对青皮汤复方拆煎前后的水煎剂中总黄酮含量 的测定，分析复方中药物配伍对其水煎剂中总黄酮含量的影响，继而分析药物的配伍规律，使处方中各药物的配伍得到合理的数据化解释。 1.3 研究意义和价值 青皮汤沿用至今，其显著的临床疗效足以说明该方的药用价值。青皮汤中的君药为青皮，其主
8、要发挥药效作用的化学成分之一就是黄酮类化合物。本次实验是以橙皮苷为对照品来测定青皮汤水煎剂中的总黄酮含量，研究此复方拆煎前后的总黄酮含量的变化，进而初步探讨处方中药物的配伍对其有效成分的影响，为处方中各药物配伍的原因得到合理的数据化解释奠定基础。 1.4 研究方法 1 文献法：参考相关 文献确定实验的具体研究方法及技术路线。 4 2 实验法：进行具体的实验研究，并对实验方法进行方法学验证。 1.5 研究创新点 目前，青皮汤的相关研究很少，对其药物配伍的相关研究未检索到。所以，本实验首次对青皮汤拆煎前后水煎剂中总黄酮含量的变化进行研究，为复方中各药物的配伍规律得到合理的数据化解释奠定一定的基础。
9、 青皮汤处方药物的收集 薄层定性分析 总黄酮含量的比较，分析处方配伍。 配伍前后水煎液的制备 紫外总 黄酮 含量的测定 5 第二章 复方水煎液样品的制备 1.1 水煎液样品制备 青皮汤处方： 青皮 3 克，莪术、三棱各 2.1 克，陈皮、神曲各1.5 克，延胡索 1 克 。 按处方量取青皮单独放置于烧杯中，同时按处方量取处方中其他药材放入另一烧杯中 加 12 倍量水浸泡约 0.5h煮沸 30min粗滤抽滤滤渣加 10倍水煮沸 20min粗滤抽滤收集滤液合并两次滤液浓缩干燥得水煎液样品 1。 按处方量取陈皮单独放置于烧杯中，同时按处方量取处方中其他药材放入另一烧杯中 加 12 倍量水浸泡约 0.
10、5h煮沸 30min粗滤抽滤滤渣加 10倍水煮沸 20min粗滤抽滤收集滤液合并两次滤液浓缩干燥得水煎液样品 2。 按处方量取处方中全部药材放入另一烧杯中 加 12 倍量水浸泡约 0.5h煮沸 30min粗滤抽滤滤渣加 10 倍水煮沸 20min粗滤抽滤收集滤液合并两次滤液浓缩干燥得水煎液样品 3。 1.2 水煎液样品浸膏得率 表 2-1 水煎液样品浸膏量测定值 （单位： g ， n=2） 编号 1 2 平均值 出膏率（ %） 1 1.271 2 1.428 3 1.582 1.308 1.413 1.533 1.290 1.421 1.558 11.5 12.7 13.9 注：与 样品 1
11、相比 ， *P0.05 6 第三章 薄层色谱法定性分析 1.1 溶液制备 1.1.1对照品溶液制备 称取橙皮苷对照品约 10mg，精密称定，加甲醇制成饱和溶液 ，作为对准品溶液。 1.1.2水煎液样品溶液制备 称取水煎液样品约 100mg，精密称定，加甲醇 20ml，加热回流20 分钟，滤过，取滤液 5ml，浓缩至 1ml，作为供试品溶液。 1.2 薄层定性分析 照薄层色谱法 (附录 B)试验，吸取上述两种溶液各 2l ，分别点于同一用 0.5氢氧化钠溶液制备的硅胶 G 薄层板上，以乙酸乙酯 -甲醇 -水 (100： 17： 13)为展开剂 a，展至约 3cm，取出，晾干，再以甲苯 -乙酸乙酯
12、 -甲酸 -水 (20： 10： 1： 1)的上层溶液为展开剂 b，展至约 8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯 (365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 1.橙皮苷 对照品 2.水煎液样品 3 3.水煎液样品 2 4.水煎液样品 1 图 3-1 水煎液样品 薄层分析 4 2 3 1 7 第四章 紫外 -可见分光光度法测定总黄酮含量 1.1 对照品溶液的制备 称取橙 皮苷对照品约 10mg, 精密称定，用 90%碱性 甲醇溶解并定容至 100ml,作为橙皮苷对照品溶液。 1.2 供试品溶液的制备 称取水煎液样品约 30mg， 精密称定，置 100ml 锥形瓶中，精密加90%碱性 甲醇 100ml， 超声 20min，过滤，将溶液转移置 100ml 容量瓶中 ， 用 碱性 90%甲醇定容至刻度 ， 混匀 ， 即得。 1.3 测定波长的选择 精密量取对照品溶液和供试品溶液各 1.5 ml，分别至 25ml 量瓶中 , 用 90%碱性甲醇 定容至刻度 ,混匀，以 90%碱性 甲醇溶液为空白 ,在 200 800nm 之间进行扫描 , 确定 最大吸收波长 为 285nm。 1. 水煎液样品 2. 橙皮苷对照品 3.空白溶剂 图 4-1 样品和对照品全波长扫描图 1 2 3
