1、 聚合酶链反应及基因突变检测方法上海交通大学医学院刘湘帆 讲师 聚合酶链式反应于 1983 年由美国 Cetus 公司的 K.Mullis 建立，并和定点突变的发明者M.Smith一起荣获1993年度诺贝尔化学奖，为生命科学领域的研究开创了崭新时代。PCR反应的特点 特异性强引物与模板结合的特异性及聚合酶的忠实性 灵敏度高指数增长，从 pg (10-12) 可扩增至 g (10-6) 水平 简便、快速2 4 小时完成扩增 对标本的纯度要求低DNA 粗制品及总 RNA 均可作为扩增模板 一、PCR反应原理和反应过程DNA的体外复制包括 3个步骤： 变性（ denaturation :94 C 9
2、5 C （ annealing :40 C 70 C （ extension :72 C 3个步骤作为 PCR 的一个 ， 完成一个 ，一个 的模板 复制为 个， 物 指数 式增长。PCR 原理5533d.NTPsDNA聚合酶引物5353535353535353反应 合 及 本变性5353535353535 3535 3535 35355TaqTaq353TaqTaq55PCR 原理535 35353553 3535 3 个 4个 贝个 8个 贝5353535 3535 3535 3535 353 35535 3535 3n个 2n 个 贝PCR 原理94 C(30 s)40-60 C(30 s)72 C(30-60 s/kb)Melt Anneal ExtendThe Polymerase Chain Reaction (PCR)1820-30X94 C(30 s)40-60 C(30 s)72 C(30-60 s/kb)Melt Anneal ExtendCycle #2NIH20-30X
