1、植物病害标本的采集制作与保存植物病害标本是高等农业院校植物病理学科本科教学不可缺少的实物，它在教学中具有直观、不受季节和区域限制的特点。因此，植物病害标本的采集、制作和保存是植物病理学科实验教学中必不可少的基础知识和技能。1 植物病害标本的采集在北方由于季节分明，作物品种丰富，植物病害发生频繁，大部分的植物病害标本都能从田间采集到。但是，病害的发生有一定的规律，要充分掌握病害发生的季节规律及寄主的生长规律才能收获症状特征比较典型的标本。1.1 病害标本采集的工具植物病害大多发生在根、茎、叶和果实上，因此所用工具要针对不同的部位，常用的工具有刀、剪、锄、锯等，还有标本夹、标本箱、标本纸、小玻瓶、
2、纸袋、标签和记录本等。1.2 标本的采集大田采集主要分为按季节采集和按寄主采集。按季节采集主要是针对每年只在特定时期发生的病害。如白粉病具有性阶段，小麦白粉病多在每年56 月能够采集到；植物的灰霉病则在低温阴雨的条件下容易发病，每年35 月最容易采到。按寄主采集主要针对寄主范围广泛的病害，如霜霉病，可以在很多植物病害的叶片上发现，常见的有莴苣、葡萄、白菜等；疫病如番茄、马铃薯、辣椒疫病等。1.3 采集标本的记录为了区分采集的不同的标本，采集时要进行记载。主要包括寄主名称、时间和地点、采集人姓名、主要发生情况和必要的生态环境因子。2 植物病害标本的制作采集的标本通过鉴定以后，除去作为分离用的标本
3、外，一般都用干燥法或浸渍法进行保存，要求能够尽量保存标本的本来性状。一些微小的可以做成玻片标本，比较难以保存的和特殊的标本可通过多媒体扫描系统或显微系统存入计算机中，制成相应的文体图形、动画、视频图像等。2.1 标本干燥制作法2.1.1 压制法。采到的植物病害标本，若干燥后容易卷缩的（如稻叶），最好随采随压。其他的可以放到采集箱内带回去后压在吸水纸中，用标本夹夹紧，日晒任其干燥。在此期间，要经常更换标本纸。夏季温度和湿度较高，容易使标本发霉变色，标本纸要勤更换。通常前34 d 换12 次/d，以后23d 换1 次，至标本完全干燥。2.1.2 烫干法或硅胶烘干法。不准备作为分离用的标本可以采用此
4、2 种方法。为了加快标本的干燥速度，更好地保持标本原有的色泽，可以将刚采集的标本放在吸水纸或布中用电熨斗来回迅速烫干或将其加载草纸和干燥过的硅胶粉的标本夹中捆紧，放入50 烘箱中23 d，使其很快干燥。2.1.3 微波炉干燥保色法。为了弥补烫干法的不足之处，刘春元等（2003）报道了根据植物病害标本的质地，摸索了一套微波干燥保色法。此法干燥迅速，保色效果较佳，可长期保存而不褪色。如豆科植物病叶处理1 min，效果最佳，症状保存完好。2.1.4 冷冻干燥法。是目前比较好的方法。标本在冷冻的情况下干燥，几乎能完全保持原有的色泽和形状。2.1.5 自然干燥法。水分很少的标本如枝干病害的枝条等，不需要
5、采取任何干燥的手段，在空气中自然干燥即可。2.2 浸渍标本制作法对于果实病害和汁液较多的病害以及肉质的子囊菌和担子菌的子实体，均可以采用浸渍法保存。但此方法占的面积大，保存时间有限，只能用于保存少量的标本，这些标本大多用于教学和示范。浸渍标本的制作，需要配备各种类型的浸渍液，主要包括各种保持原本颜色的保存液和防腐的保存液。2.2.1 保色浸渍液的配制。根据植物果实病害的寄主植物的颜色，可将保色的浸渍液分为保存绿色浸渍液、保存黄色和桔色的浸渍液、保存红色的浸渍液等。保存绿色的浸渍液。保存绿色的浸渍液很多，要根据不同的植物病害标本选择适当的方法，才能达到好的效果。如醋酸铜浸渍液：将醋酸铜结晶逐渐加
6、在50的醋酸溶液中，到不再溶解为止，原液要根据标本颜色的不同将其用水稀释34 倍，然后使用。将标本加入到煮沸的稀释液中，继续加热，标本的绿色开始褪去，经34 min，使绿色恢复后，将其取出，用清水冲净，保存于5%的福尔马林溶液中，或压制成干燥的标本。这种方法保色效果良好，但与原色稍有出入。不能煮的如淡绿色苹果、梨、绿色葡萄等的病害标本可直接浸泡在1%亚硫酸100ml、95%酒精100 ml、水800 ml 配成的溶液中浸泡1020d，然后取出，冲洗干净，再保存在5% 的福尔马林溶液中。另外，还有硫酸铜亚硫酸浸渍液、瓦查（Vacha）浸渍液等，也是保存绿色标本常用的方法。保存红色的浸渍液。对于红
7、色的果实病害标本如草莓、辣椒、马铃薯以及其他的植物红色组织，选择病害症状典型的标本，可以将标本浸入瓦查的红色浸渍液（硝酸亚钴15 g，福尔马林25 ml，氯化锡10 g，水1 000 ml）内，2 周后取出冲洗干净，浸泡在亚硫酸3050ml，福尔马林10 ml，酒精（95%）10 ml，水1 000 ml 配成的溶液中加以保存。保存黄色和桔红色标本的浸渍液。含叶黄素和胡萝卜素的果实如杏、梨、柿子、柑橘等，用亚硫酸溶液保存比较适宜。方法是将亚硫酸（含SO2 5%6%） 配成4%10%的水溶液（含SO2 0.2%0.5% ）中1 。总之，各种保色的浸渍液，除有些保存绿色的浸渍液外，保存其他颜色的浸
8、渍液，效果都不理想。为了更好的显示植物病害的危害状，最好采用多媒体系统将其扫描或摄影，制作成相应的图片和视频进行保存。2.2.2 防腐浸渍液。对于浸渍标本的保存来说，防腐是最重要的一个环节。因此，需要防腐浸渍液对其进行保存。主要成分如下： 福尔马林 50 ml， 酒精（95%）300 ml， 水 2 000ml，也可单用福尔马林和酒精。3 植物病害标本的保存3.1 蜡叶标本的保存3.1.1 散装标本。将干燥好的蜡叶标本放进消毒室或消毒箱内，传统的方法是用酒精、升汞液消毒，或将敌敌畏或四氯化碳与二硫化碳混合液置于玻皿内，利用毒气熏杀标本上的虫或虫卵，约 3 d 后即可取出。有条件也在-40 低温
9、处理消毒。将消毒好的蜡叶标本鉴定、整理，然后装进标本袋中，贴好标签，以备实验课用作实物标本，供学生上课使用。3.1.2 制作盒装标本。将植物病害症状典型的蜡叶标本和干燥的果实标本，可利用玻面纸盒的方法进行保藏。按照标本的大小，选择合适的纸盒（一般为长 28 cm、宽 20 cm、高 1.53.0 cm） ，在纸盒中铺 1 层棉花，棉花上放标本和标签，注明寄主植物、寄生菌的名称、采集时间等，然后加上玻盖。棉花中可加入少量的樟脑粉或驱虫的药剂。这种方法制作的标本可长期保存，循环使用。3.1.3 塑封标本。适合保存叶片标本和较小的茎秆（如小麦、水稻）标本。做法是：根据植物病害标本的大小选择适当的护卡
10、膜，将 1 张比护卡膜稍小的白纸放入护卡膜中，在白纸右下角写上该标本的标签，然后把标本放在白纸上摆好，再把膜放平，放入预热到 160 的过塑机封塑即可。如果标本较小、较窄，1 张纸上可放几个标本，可根据需要分类装订成册。这种方法做出的标本弥补了以上盒装方法存在许多缺点，如标本盒体积大，携带不便，造价较高，只能用肉眼和手持放大镜观察标本的局部，对细小组织和结构观察困难，标本易变色、发霉、受虫蛀、不耐贮存等。3.2 浸渍标本的保存将已鉴别的标本适当处理后放在盛有保存液的标本瓶中，用蜡或火棉胶封口后，将标签贴在标本瓶上进行保存。由于浸渍液所使用的药品大都为挥发性的，或容易氧化，因此浸渍标本最好放在暗
11、处，以减少药液的氧化，或瓶口因温度变化而造成破裂。4 注意事项植物病害标本的采集受植物生长季节、气候条件、采集地点、采集时间及作物品种布局等多种因素的影响，要把握时机才能采到需要的症状典型的标本。另外，对于病害标本的制作，不同部位制作和保存的方法不同。蜡叶标本在保存过程中，要保持标本室的干燥才能防止发霉，但干燥标本易遭虫蛀，因此最好每年用甲基溴等药剂熏蒸，以保证标本的完好。浸渍标本保存液也要经常更换，以保证标本不腐烂。这样，逐渐积累和补充各种病害标本，才能使实验课程顺利进行，达到预期的良好效果。昆虫标本制作方法一、昆虫标本的干制法1. 用针刺晒干。用昆虫针由昆虫的胸部刺过, 插在软木板上。插人
12、的针应当垂直, 插人的高度当用刺虫台校整, 自然干固。2. 粘虫纸粘固。较小的昆虫，如蚤、蚊等, 将其粘在粘虫纸上后,剪下纸块, 用昆虫针刺在纸上固定晒干。3. 展翅晒干。翅较大的昆虫,针刺后常常两翅下落, 这时应使用展翅板, 将其两翅伸平并用纸条固定晒干。4. 去除内脏。对较大的昆虫,内脏极易腐败生霉, 应去除内脏。在腹或背侧开口取出内脏, 再用脱脂棉花加以充填, 并放人少量的苯酚，再用昆虫针从胸中刺人晒干。5. 填蜡法。对较大的蛾类幼虫, 在去内脏之后（去内脏时用注射器从肛门刺人把内脏全部吸除）, 把化溶的石蜡用注射器从肛门注入其体腔内, 呈现原来的饱满状态。放人冷水中加以固化。6. 去脏
13、烤干法。把昆虫的内脏抽出之后, 用二联球慢慢打人空气使之体腔充起, 外加红外线灯烘烤至干。7. 埋藏法。把昆虫经固定脱水之后, 用熔化的酒精松香稠液慢慢浇灌, 使昆虫被包埋藏在松香之中；另法是把昆虫脱水后, 用白明胶液包藏之。明胶液配法明胶加水和石碳酸, 用水浴法溶化后浇埋之。此外还可以用万能胶包藏, 效果较好。把脱水的材料放在白纸上用万能胶滴埋, 使其全部躯体都粘上胶, 待后再滴一次, 滴后应加罩防尘。这种作法效果较好,包埋极薄的一层胶, 不影响观察, 增加材料的坚固性能, 能防潮防霉。二、昆虫标本浸渍法1. 福尔马林浸存法。用 5%福尔马林浸泡。经 3-5d 后换液一次再移入 5%福尔马林
14、中保存。2. 酒精浸存法。用 50%酒精固定 12-24h 后移入 70%酒精中保存。3. 酒精甘油、甲醛甘油浸存法。将上二配方分别加 20%-40%甘油效果更好。能增加昆虫肢足关节的柔软性，防治了单用酒精脱水变硬的缺点。鼠类的标本采制和保藏山西省农科院济经作物研究所 柳 枢在进行鼠类区系、生态调查，灭鼠防治工作中，必须要做好一件事情，就是收集标本材料，保存和制作好各种鼠类的标本，作为研究生物科学的证据，标本的形迹是最重要的记录材料，采集标本，鼠夹是最常用的捕鼠工具，种类型号很多，可根据鼠的活动特点 栖息环境以及鼠类的体型大小分别选用。为了不损伤被捕获的动物，也可选用各种捕鼠笼捕抓活体。此外，
15、亦也有猎枪、小口径步枪猎取动物。在药物灭鼠现场则能收集妥善处理。尤其是动物疫病流行地区或不疑地区，在无十分安全可靠的消毒措施及手段时，不要随便进行采集。必须指出，在进行该项工作时，应穿戴防疫服装、鞋、袜等，以避被跳蚤等叮咬感染动物流行病。(1)制作标本所需要的物品1、消毒用品：氯仿、来苏儿、酒精、肥皂、洗涤剂等。2、防腐剂：砒矾粉(配方：亚砒酸、明矾各半研制成细粉)或砒皂膏(配方亚砒酸五分之一、樟脑五分之二，切碎的肥皂五分之二混合后加水煮成膏)樟脑或卫生球等。3、工具和物品：熏桶、解剖刀、小剪刀、钳子、镊子、天平或小称、钢卷尺、铅丝(粗细根据标本而定)、木板、毛巾、棉花、针、线、标签、钢笔、铅
16、笔、墨水、登记本、大头针等等。制作生态标本时，还要准备假眼等。 (二 )剥制前的处理对于获得的标本，务必置于鼠袋内并扎紧袋口，谨防鼠类体外寄生虫逸出。同时，使用标签注明采集地点、时间、原则上应以一鼠一袋为准。将带回的鼠体，首先放在熏桶内、倒入一定量的乙醚、氯仿或氰化钙，把体外寄生虫、蚤、螨等熏死和暂时麻醉，然后，用昆虫镊或密梳子清拣昆虫。捕获的活鼠可就地破坏延髓、压挤内藏、窒息等法处死。或置于密闭的容器内充以 CO2 窒息处死。对于获得的罕见鼠种，即使是幼鼠和有血迹污染，或稍有腐烂尸体，也要用布或滑石粉等擦洗干净，设法制成标本。经过上述处理的死动物，即可进行标本的测量，鉴定。(三 )外部测量与
17、鉴别 已杀灭体外寄生虫的死亡动物，挑选毛皮、头骨、四肢及尾部完整的个体做标本。虽有损伤，但可能是稀有、珍贵或可疑的种类也应选取。选取的标本应先记录体重，以克为单位，然后进行外部测量。外部测量以毫米为单位，取其整数即可。测量器械可用两脚规、钢卷尺、卡尺等。测量前，将鼠体仰放桌上或搪瓷盘内，取其自然姿态，若是僵死蜷缩的标本，应轻轻揉按直，其使恢复自然姿势。测定及记载项目包括：标本编号、采集地、日期、性别、体长、后足长、尾长、耳等(见图 1)动物的雌雄鉴别，主要决定于动物的外生殖器结构，雌雄有发达的乳腺位于胸腹部和鼠鼷部两侧；雄性的睾丸自腹腔降落至鼠鼷部的阴囊里。对于幼体发育不完全，上述特征不易看清
18、，因此不易鉴别。一般说来，可根据位于腹部正中线后端的泌尿生殖乳头与肛门的距离长短而定，雄性比雌性距离为长。在上述方法皆无法鉴别性别或对于不熟悉的种类，可剖开腹部，通过内生殖器观察来判断。雄性可看到阴茎及睾丸，雌性可看到输卵管及子宫带。(四 )剥制方法 将鼠体仰放于平板上，用小剪刀或解剖刀轻轻沿腹部正中线，至生殖器前端切开表皮。 (不可用力过大，否则会切开腹肌露出内脏)，在刀口处小心把两侧表皮与肌肉分开，直到膝关节，并推出后腿的膝关节用剪刀将膝关节处剪断。(如图 2)为了使这项工作作得方便，把后腿足略微向里推一点，此时关膝弯曲，而关节上去了。清除大腿的肌肉，把皮翻过来使恢复原态。另一侧用同样的方
19、法处理。 把生殖器及直肠与皮肤连接处切断，便可剥离尾部。以后修剪一下尾周围的结缔组织纤维，在此后用一只手的食指与拇指摄紧尾基部皮缘，缓缓紧拉，尾椎即可抽出( 见图 3)。切记不可用力过猛、否则尾椎会断。尾部剥完后，继续脱袜子式的向前推脱，一直脱到前肢，从肩胛处切断。头部剥皮比较复杂，应特别小心谨慎， 以免碰伤皮肤或头骨。当翻至颈部上端时会遇到一层半透明的软骨膜，这是耳壳。将周围的结缔组织轻轻剥离，细剪着耳部的皮肤，再向前剥至眼部，要特别小心，切匆剥破。轻拉皮与头骨，可见到皮肤与眼球之间有一白色的园环，这就是眼脸。从脂白环与眼球之间小心剪开，继剥至吻部。 先剥下唇，后剥上唇，至鼻端从鼻骨处切断。
20、到此为止，鼠的尸体与鼠皮完全分开了。头胄由颈部剪下，系上与鼠皮和采集薄上的一致编号，另行处理。如果要剥制生态标本，头骨要保留在皮上。在上颔的鼻尖和下颔嘴唇的皮不要完全切开，适当的保留一点，由头骨后部剪下，把舌头、眼睛、脑浆挖出来，把头骨上的肌肉去干净。 (五 )标本的填装与制作1、固态标本制作法：首先把皮上残留肉和脂肪刮去，把破裂的地方要缝合好。将剥皮时留在皮上的四肢骨插上细铁丝，涂以防腐剂，用棉花缠在四肢骨骼上，使其如生活有肌肉那样丰满，取长等于尾尖到胸部的鸟羽轴或竹签、铁丝等卷以适当的棉花插入尾鞘。然后把鼠皮翻过来，开始填装，填入的棉花应均匀不管装在什么部位，都要平而松软，与原来肌肉相似。
21、填充完毕后，将上下唇缝合，再缝合腹皮。缝合时应注意要从里往外穿针，穿针时以免把毛带进皮的内面。由上而下先拉一针，然后再左右拉线。最后调整姿态，先用小镊子张鼓眼脸，两耳竖直，胡须摆正，将皮毛梳理好。标签一般系在右后腿上。四肢用大头针固定在硬纸板或木板上，固定时前肢并拢， 脚掌向下，两后肢靠紧尾巴，足掌向下，尾平放于两后腿之间。而后分别在前飞后肢的掌部用大头针加以固定(图 4)。在阴干过程中还要不断加以整形，直到干为止。2、生态标本制作法：生态标本的制作法与固态标本相同，但是还需要用铁丝支持其肢体，并按其生活时的姿态进行制作。铁丝的粗细应依动物个体的大小而不同。头部、前后左右附肢及尾部各用一根铁丝
22、支撑。头部的铁丝先用棉花卷成与颈部原有肌肉粗细长短相同，其一端固定于头骨上。眼窝、吻部等除去肌肉的部分，用棉花填充塑成而与原形相似，将它放在头皮之内，按其原头部之形状矫正眼、耳、脸飞唇的位置。取两根细铁丝，一端由足底沿肢骨后侧插入肢内，外留一段为固定之用。穿人的铁丝沿肢骨弯曲，用线缚于骨骼上，外卷棉花以代替除去的肌肉。四肢皮肤翻回原状，但应注意不可扭转。尾巴的制法与固态标本同。先将头和前肢的铁丝在相当于肩胛骨外扭合，再将后肢和尾巴的铁丝扭合成适当的躯干支柱，腹内填充棉花，缝合切口。将制成的生态标本，按所需求的姿态固定于板上或生境架上，整理眼睛耳朵、嘴唇位置，唇间填入适当的棉花或粘土，使它与原肌
23、肉一样，胡须摆正，两耳竖直，眼窝内嵌入大小适宜的假眼睛。至此生态标本制作完毕。假眼的制作有许多方法。小型鼠类的眼睛因其虹彩不大明显，可采用黑疙瘩钉。对于较大的鼠类，可采用彩色假眼，即用大小适当的半球形黑色飞玻璃体，或黑豆粒等。制作生态标本时，必须熟悉鼠类的生活习性和形态特征，这样才能制成如生的标本 o3、浸制标本制作：暂时性的保存野外捕获的鼠类或幼小的哺乳鼠，胎仔、生殖系统等资料，均可用浸制液保存。一般采得上述标本可直接浸于 7 5酒精，或 5-10甲醛 (福尔马林) 溶液，或两者各半的混合液中。对幼小鼠或胎盘内脏等，宜用较稀药液浸泡，否则，容易硬化。体型较大的鼠体处死后，应将腹部剖开，使保存
24、溶液易于渗透到内部，以免腐烂。 活的鼠类标本可不经杀死直接投入浸泡液中，待它死后固定变硬之前，将附肢及其它部分调整适当姿态，以便日后观察研究。各浸制标本都应拴以标签，用铅笔写上采集时间飞地点、种类等。为防止保存液蒸发，装有浸制标本的标本瓶除加盖外，还需将盖缝四周以石腊密封。药液如变浑浊，要随时更换。4、头骨的标本制作法：头骨是标本的一个组成部分，在分类签定中是不可缺少的。鼠类鉴别，主要是根据外部形态与头骨结构特征进行的。因此，制成剥制的标本，其头骨均应制成相应的头骨标本。剥皮后的动物从颈部将头切下，用水蒸法将附在头骨下的肌肉煮熟后剥制干净，用小勺子或小镊子掏净脑髓，用刷子刷净后即成。较大的头骨附着的筋健不易熟烂，可少加些碱面。较小的头骨，用水煮时，时间不要过长，以免由于过于熟烂至头骨破碎。此外，小型头骨的制作也可采用生刮法或发酵法，即将头骨连同附带的肌肉浸泡于装清水的玻璃瓶中或埋在土中，数日后肌肉自行腐烂，然后用清水洗净制成完整的头骨标本，制成的头骨标本，如需漂白，可放于烈日下暴晒或在百
